[發明專利]一種編碼豬圓環病毒2型Cap蛋白的基因及其應用

有效

• 申請號: 201710466551.0
• 申請日: 2017-06-20
• 公開（公告）號: CN107337718B
• 公開（公告）日: 2021-06-01
• 發明（設計）人: 李俊;吳曉燕;時建立;彭喆;王金寶;于江;鄭書軒;張玲玲;辛長勛;王碩
• 申請（專利權）人: 山東省農業科學院畜牧獸醫研究所
• 主分類號: C07K14/01
• 分類號: C07K14/01;A61K39/12;A61P31/20;C12N1/21;C12R1/19
• 代理公司: 濟南泉城專利商標事務所 37218
• 代理人: 李桂存

本發明提供了一種易于在大腸桿菌中表達的編碼豬圓環病毒2型Cap蛋白的基因，含有SEQ ID NO.1所示的序列；及一種含有上述基因的重組表達載體及含有上述重組載體的重組菌；本發明還提供了一種誘導重組菌生產豬圓環病毒2型Cap蛋白的方法及利用該蛋白生產豬圓環病毒2型疫苗方面的應用。本發明實現了全長Cap蛋白在大腸桿菌中的高效表達，且操作簡單，成本低廉，易于規模化生產；本發明的重組菌及疫苗在預防豬圓環病毒2型疾病方面有廣泛的應用前景。

技術領域

本發明涉及一種編碼豬圓環病毒2型Cap蛋白的基因及其應用，屬于分子生物學領域。

背景技術

豬圓環病毒2型(Porcine circovirus 2，PCV-2)是近年來新發現的、危害養豬業較嚴重的病毒之一，該病毒與豬的多種疾病綜合征密切相關，包括豬斷奶后多系統衰竭綜合征(Post-weaning multi-systemic wasting syndrome，PMWS)和母豬的繁殖障礙(Sowabort ion and mortali ty syndrome，SAMS)等。自1991年加拿大首次報道PMWS以來，該病現已波及世界各地在2010年國際豬獸醫大會(IPVS)上，豬圓環病毒感染成為關注度最高的疾病，是全球公認的危害養豬業的重要傳染病之一。近年來，國內豬圓環病毒感染呈上升趨勢，在我國豬群中流行十分嚴重，給我國養豬業造成了重大的經濟損失。

PCV-2基因組全長1767bp或1768bp，共包含11個開放閱讀框(ORF)，其中ORF1、ORF2是兩個最大的開放閱讀框，分別編碼復制相關蛋白(Rep蛋白)和衣殼蛋白(Cap蛋白)。Cap蛋白是主要的結構蛋白，研究表明其N端含有一個由41個氨基酸殘基組成的核定位信號(NLS)，且含有大量的大腸埃希菌稀有密碼子，這將嚴重影響外源蛋白的表達。相關研究證實，Cap蛋白免疫動物可以產生病毒的中和抗體。ORF2基因已經作為研制基因工程疫苗的重點對象。但是，現有技術中Cap蛋白采用真核表達系統產量低，分離純化困難；而ORF2編碼蛋白的N端存在著大量串聯或單聯的大腸埃希氏菌稀有密碼子，嚴重影響在大腸桿菌中的表達，所以目前報道進行原核表達的多為截短型Cap蛋白，這樣雖然蛋白表達量較高，但不是完整的Cap蛋白，不能形成完整的病毒樣顆粒，同時一些功能性信號區域和保守序列沒能表達。

發明內容

針對目前完整Cap蛋白難以使用大腸桿菌規模化生產等問題，本發明提供一種易于可溶性表達的編碼豬圓環病毒2型Cap蛋白的基因。

本發明的另一目的是提供含有上述基因的重組表達載體。

本發明的再一目的是提供一種目的蛋白的表達量高，表達產物易于純化的含有上述基因的重組菌。

本發明還有一目的是提供一種上述重組菌表達的豬圓環病毒2型Cap蛋白在制備豬圓環病毒2型疫苗方面的應用。

為實現上述目的，本發明采用如下技術方案。

一種編碼豬圓環病毒2型Cap蛋白的基因，含有SEQ ID NO.1所示的序列。

所述基因含有BamH I和Xho I限制性內切酶酶切位點。

所述編碼豬圓環病毒2型Cap蛋白的基因序列如SEQ ID NO.2所示。

一種含有上述基因的重組表達載體，該重組表達載體是將所述基因插入原核表達載體pET30a的BamH I和Xho I酶切位點之間所得。

一種含有上述基因的重組菌，所述重組菌是將所述重組表達載體轉化大腸桿菌BL21所得。

所述重組菌表達豬圓環病毒2型Cap蛋白為誘導型表達。

所述重組菌表達豬圓環病毒2型Cap蛋白的序列如SEQ ID NO.3所示。

一種上述重組菌在制備豬圓環病毒2型疫苗中的應用。