[發明專利]一種誘導菌劑及應用其緩解反芻動物瘤胃酸中毒的方法

有效

• 申請號: 201710464024.6
• 申請日: 2017-06-19
• 公開（公告）號: CN107164294B
• 公開（公告）日: 2020-11-03
• 發明（設計）人: 王洪榮;陳連民;沈宜釗;丁洛陽;趙芳芳;徐進昊
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: C12N1/36
• 分類號: C12N1/36;C12N1/20;A23K10/18;A23K50/10;C12R1/01
• 代理公司: 南京鐘山專利代理有限公司 32252
• 代理人: 戴朝榮

1.一種M. elsdenii LC1誘導菌劑，其特征在于，所述菌劑的制備過程為：在厭氧工作站進行種子培養后，所用種子培養基是以水為溶質，向其中加入質量比為1.0%胰蛋白胨，0.5%酵母提取物，0.5%牛肉提取物，0.5%葡萄糖，0.05%半胱氨酸鹽酸鹽，0.4% Na2HPO4，5.0%無菌脫纖維馬血，0.002% D,L-乳酸，0.0005%刃天青，將配置的種子培養基液高溫105到110℃滅菌除氧后密封冷卻，調節pH為6.8到7.0；取出種子培養液，向高營養誘導培養基中直接接種種子培養液進行高營養富集誘導，所述高營養誘導培養基是以水為溶質，向其中加入質量比為0.1%胰蛋白胨，0.1%酵母提取物，0.06%半胱氨酸鹽酸，0.09% K2HPO4，0.09% KH2PO4，0.18% NaCl，0.024% CaCl·2H2O，0.083% MgSO4·7H2O，0.18% (NH3)2SO4，3.0%胎牛血清，0.3%葡萄糖及0.36% D,L-乳酸，將配置的發酵產酸培養基液在105到110℃高溫滅菌10分鐘除氧后密封冷卻，調節pH為 6.7到7.0；后接種至中營養誘導培養基進行中營養富集誘導，所述中營養誘導培養基是以水為溶質，向其中加入質量比為0.1%胰蛋白胨，0.1%酵母提取物，0.06%半胱氨酸鹽酸，0.09% K2HPO4，0.09% KH2PO4，0.18% NaCl，0.024%CaCl·2H2O，0.083% MgSO4· 7H2O，0.18% (NH3)2SO4及0.18% D,L-乳酸；最后接種至低營養誘導培養基進行低營養富集誘導，所述低營養誘導培養基是以水為溶質，向其中加入質量比為0.1%胰蛋白胨，0.1%酵母提取物，0.06%半胱氨酸鹽酸，0.09% K2HPO4，0.09%KH2PO4，0.18% NaCl，0.024% CaCl·2H2O，0.083% MgSO4· 7H2O，0.18% (NH3)2SO4及0.09% D,L-乳酸；得到M. elsdenii LC1誘導菌劑；誘導過程中誘導罐密閉且無需通入其他氣體，以乳酸為發酵底物，進行底物不同乳酸濃度的梯度誘導，誘導全過程保持厭氧。

2.根據權利要求1所述的M. elsdenii LC1誘導菌劑，其特征在于，所述種子培養過程為：取出凍存的M. elsdenii LC1菌株種子細菌液，以1%的接種量接種種子培養基，36~39℃厭氧培養，所述培養時間為8到10小時，待到種子培養基渾濁度OD值為0.38~0.42時，取出種子培養液接種到新的種子培養基中繼續培養，所述培養時間為8到10小時，再次待到培養液渾濁度OD值為0.38~0.42時，取出種子培養液進行高營養富集誘導。

3.根據權利要求1所述的M. elsdenii LC1誘導菌劑，其特征在于，所述高營養富集誘導是將種子培養液以0.3%到1%的量接種到高營養誘導培養基，誘導水浴溫度控制為37℃到39℃，無需通入特殊氣體，設置培養液攪拌速度為100到200rpm，誘導生長18到24小時后取菌液接種至一新高營養誘導培養基，如此往復3到4次后，取出誘導菌液進行中營養富集誘導。

4.根據權利要求1所述的M. elsdenii LC1誘導菌劑，其特征在于，所述中營養富集誘導是將高營養誘導菌液以0.5%到1%的量接種到中營養誘導培養基，誘導水浴溫度控制為37℃到39℃，無需通入特殊氣體，設置培養液攪拌速度為100到200rpm，誘導生長20到26小時后取菌液接種至一新中營養誘導培養基，如此往復3到4次后，取出誘導菌液進行低營養富集誘導。