[發明專利]一種快速獲得黑果枸杞再生苗的培育方法

有效

• 申請號: 201710463521.4
• 申請日: 2017-06-19
• 公開（公告）號: CN107135950B
• 公開（公告）日: 2020-02-21
• 發明（設計）人: 王立科;毛善國;陳全戰;楊平;張邊江;唐寧
• 申請（專利權）人: 南京曉莊學院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00;A01C1/00
• 代理公司: 北京三聚陽光知識產權代理有限公司 11250
• 代理人: 閆聰彥

1.一種快速獲得黑果枸杞再生苗的培育方法，其特征在于：所述方法是直接由黑果枸杞的無菌種苗獲得愈傷組織，再經組織培養培育得到黑果枸杞再生苗；具體包括如下步驟：

（1）種子的消毒

選取黑果枸杞種子，依次經消毒劑消毒及無菌水沖洗后備用；

（2）無菌種苗的獲得

將步驟（1）的種子置于MS-0培養基中，待所述種子萌發8～12天后得到無菌種苗；

所述MS-0培養基是通過向每升MS培養基中添加30g蔗糖和8.0g瓊脂而得，所述MS-0培養基的pH值為5.0～5.5；

（3）愈傷組織的誘導

將步驟（2）的無菌種苗移栽至MS-1培養基中以誘導形成愈傷組織，培養條件為：溫度23～27℃、光照12 h/d、培養基pH值為5.0～5.5，培養35~45天；

所述MS-1培養基是通過向每升MS培養基中添加0.5～1.0mgNAA、1.5～2.5 mg 6-BA、30g蔗糖及8.0g瓊脂而得；

（4）不定芽的獲得

將步驟（3）的愈傷組織從外植體上剝離下來后置于MS-2培養基中以誘導分化不定芽，培養條件為：溫度23～27℃、光照14 h/d、培養基pH值為5.0～5.5，增殖培養3~5代；

所述MS-2培養基是通過向每升MS培養基中添加0.5～1.0mgNAA、0.5～1.4 mg 6-BA、30g蔗糖及6.0g瓊脂而得；

（5）根的誘導

將步驟（4）的不定芽移栽到所述MS-0培養基中以誘導生根，即得黑果枸杞再生苗；

培養條件為：溫度23～27℃、光照14 h/d、培養時間17~22天。

2.根據權利要求1所述的快速獲得黑果枸杞再生苗的培育方法，其特征在于：步驟（1）中的消毒環節為，先用70v%的酒精浸泡3~7min，再用0.1wt%的氯化汞溶液消毒10~20min。

3.根據權利要求2所述的快速獲得黑果枸杞再生苗的培育方法，其特征在于所述氯化汞溶液消毒的時間為15min。

4.根據權利要求1所述的快速獲得黑果枸杞再生苗的培育方法，其特征在于：所述MS培養基的配制方法包括，將MS微量元素母液、MS肌醇母液、MS鐵鹽母液分別稀釋100倍后與稀釋了40倍的MS大量元素母液混合；

所述MS微量元素母液、MS肌醇母液、MS鐵鹽母液、MS大量元素母液的體積之比為5:5:5:2；

所述MS大量元素母液的組成為，每升無菌水中含KNO₃ 76.0g、NH₄NO₃ 66.0g、MgSO₄?7H₂O14.8 g、CaCl₂?2H₂O 17.6 g、無水CaCl₂ 13.28 g；

所述MS微量元素母液的組成為，每升無菌水中含MnSO₄?H₂O 2.23 g、ZnSO₄?7H₂O 0.86g、H₃BO₃ 0.62 g、KI 0.083 g、Na₂MoO₄?2H₂O 0.025 g、CuSO₄?5H₂O 0.0025 g、CoCl₂?6H₂O0.0025 g；

所述MS肌醇母液的組成為，每升無菌水中含肌醇 10.0 g、煙酸 0.1 g、Vit B₁ 1.0 g、Vit B₆ 0.1 g；

所述MS鐵鹽母液的組成為，FeSO₄?7H₂O 2.78 g、Na₂EDTA 3.73 g。

5.根據權利要求1所述的一種快速獲得黑果枸杞再生苗的培育方法，其特征在于：所述MS-0培養基、MS-1培養基、MS-2培養基的pH值均為5.2。