[發明專利]一種標準化體外腫瘤微組織的制備方法

在審

• 申請號: 201710462600.3
• 申請日: 2017-06-19
• 公開（公告）號: CN107421791A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 秦建華;李中玉
• 申請（專利權）人: 中國科學院大連化學物理研究所
• 主分類號: G01N1/28
• 分類號: G01N1/28;G01N1/34
• 代理公司: 沈陽晨創科技專利代理有限責任公司21001
• 代理人: 鄭虹

技術領域

本發明涉及體外腫瘤組織培養領域，具體涉及一種腫瘤微組織的制備方法。

背景技術

癌癥是嚴重威脅人類健康的惡性疾病，已經成為影響我國居民健康的主要的死亡原因之一。世界衛生組織(WHO)專家預測，2020年全球人口80億，癌癥新發病例將達到2000萬，1200萬人死于癌癥，癌癥將成為新世紀人類的第一殺手,并成為全球最大的公共衛生問題之一。因此，采取有效的手段治療癌癥就顯得極其重要了。

現有許多類型癌癥的預后仍然非常差，迫切需要開發新的治療方案，這就需要對腫瘤進行深入的研究。但是，如何在體外有效的開展腫瘤研究的工作仍是醫藥領域的一大挑戰。現有技術往往通過酶消化法分離的腫瘤細胞，體外增殖后再進行試驗。但對細胞本身損傷較大，常規的原代腫瘤細胞脫離體內環境后，在體外最初培養的24小時后，大部分細胞都會逐漸死亡飄浮，能夠貼壁生長的細胞占極少比例。傳統的原代腫瘤細胞培養操作復雜，耗時較長，樣品易污染，靈敏度較低，最關鍵是體外擴增本身具有細胞選擇作用，得到的細胞無法代表體內真實細胞組成。

原代腫瘤樣本的獲得極其珍貴，其保留原代腫瘤微環境和基本特性。依靠這種模型可以深入探究腫瘤發生機制及發現潛在治療靶點，同時還可以幫助預測患者對治療藥物可能產生的反應。可以用于在體外培養及藥物測試，還有用于接種到動物體內繼續培養以獲取近似患者的信息。但是腫瘤組織的性狀和質地決定了其在體外不易處理，操作完全靠肉眼判斷，具有較大隨機性，為后續研究帶來了較大的誤差，影響了獲得數據的可靠性。這制約了腫瘤組織體外研究的開展。因此，需要一個能夠簡便、快捷、高效、低成本的方法能夠制備大小均一的，能夠標準化的腫瘤微組織，這在腫瘤生物學研究及醫藥研發中將具有極大的應用前景。

發明內容

本發明的目的是提供一種大小均一、標準化的腫瘤微組織制備方法。本發明的培養物可用于癌癥研究、癌癥治療和癌癥診斷。本發明的方法和培養物非常適合以高通量形式使用。例如，本發明的培養物在用于篩選抗癌劑的方法中和在用于試驗抗癌劑效力的方法中是有用的。

該標準化體外腫瘤微組織的制備方法，包括以下步驟，

步驟一、腫瘤組織的處理：制備實體瘤組織，腫瘤取材部位非常重要,體積較大的腫瘤組織中有退變或壞死區，取材時盡量避免用退變組織，挑選活力較好的部位。將其置于添加抗生素的PBS中進行處理，同時抗生素的使用，可以有效去除腫瘤組織的細菌，獲得無菌的腫瘤組織材料；

步驟二、腫瘤微組織的制備：將步驟一制備所得的腫瘤組織材料剪碎，剪碎的腫瘤組織轉移至離心管，離心并小心去上清，獲得目標大小的腫瘤微組織；

步驟三、將步驟二制備所獲得的腫瘤微組織通過較大規格的多孔篩1；收集濾過的腫瘤微組織；

步驟四、將步驟三制備所獲得的腫瘤微組織通過較小規格的多孔篩2；收集未濾過的腫瘤微組織。

步驟五、收獲標準化腫瘤微組織。

上述的腫瘤微組織的制備方法中，抗生素為青霉素類、頭孢菌素類、鏈霉素、慶大霉素、紅霉素和白霉素的一種或兩種或多種混合。

上述的腫瘤微組織的制備方法中，目標大小腫瘤組織的大小為0.1-3mm。

上述的腫瘤微組織的制備方法中，較大規格的多孔篩1，其規格為孔徑0.1-3mm。

上述的腫瘤微組織的制備方法中，較小規格的多孔篩2，其規格為孔徑0.1-3mm。

上述的腫瘤微組織的制備方法中，較小規格的多孔篩2的孔徑小于較大規格的多孔篩1的孔徑。

上述的腫瘤微組織的制備方法中，標準化腫瘤微組織的直徑，小于多孔篩1的孔徑，大于多孔篩2的孔徑。

上述的腫瘤微組織的制備方法，其特征在于：所述腫瘤微組織為肺癌、腎癌、子宮內膜癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、膠質瘤、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、原髓細胞白血病和結腸癌等實體瘤中的任一種。

上述腫瘤微組織的制備方法中，腫瘤微組織大小差異可控在50μm內。

本發明制備了一個標準化的腫瘤微組織。以此樣本進行藥物評價，均一性更好，獲得的數據更具可比性，降低因為腫瘤大小不一導致的生物學差異。

可以用于腫瘤的生物學研究及后續醫藥評價的應用。本發明與現有方法相比，解決了腫瘤樣本處理無法標準化的問題，考慮到樣本均一性的問題，更利于相互比較，而且操作簡單快捷低成本，可以大量制備。

附圖說明

圖1本發明技術流程示意圖；a腫瘤微組織初次過濾示意圖；b腫瘤微組織二次過濾示意圖；c腫瘤微組織截留收獲示意圖。