[發(fā)明專利]一種原位測定飲用水生物活性炭TTC?脫氫酶活性的方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710462114.1
• 申請日: 2017-06-16
• 公開（公告）號: CN107084934A
• 公開（公告）日: 2017-08-22
• 發(fā)明（設計）人: 李偉光;俞洋;邊繼踴;孟利強
• 申請（專利權）人: 哈爾濱工業(yè)大學
• 主分類號: G01N21/31
• 分類號: G01N21/31
• 代理公司: 哈爾濱市松花江專利商標事務所23109
• 代理人: 侯靜

1.一種原位測定飲用水生物活性炭TTC-脫氫酶活性的方法，其特征在于原位測定飲用水生物活性炭TTC-脫氫酶活性的方法是按以下步驟進行的：

一、以吸光度值做橫坐標，以TF濃度做縱坐標，繪出TF標準曲線；

二、樣品處理：從水中取出待測的活性炭濾料，用蒸餾水反復洗滌3次～4次，然后將洗滌后的活性炭濾料按質量平均分成2份，分別放入兩支具塞比色管中；

三、向步驟二中的兩支具塞比色管中分別加入Tris-HCL緩沖溶液、質量分數為0.36％的Na₂SO₃溶液、濃度為0.1mol/L的葡萄糖溶液和質量濃度為0.4％的TTC溶液至活性炭濾料完全浸沒，然后向其中一支具塞比色管中加入甲醛溶液終止酶反應作為空白組，另一支具塞比色管作為試驗組；所述的質量濃度為0.4％的TTC溶液和質量分數為0.36％的Na₂SO₃溶液的體積比為1:1；所述的質量濃度為0.4％的TTC溶液和濃度為0.1mol/L的葡萄糖溶液的體積比為1:1；所述的質量濃度為0.4％的TTC溶液和Tris-HCL緩沖溶液的體積比為1:3；

四、樣品培養(yǎng)：將試驗組和空白組的具塞比色管均放入溫度為36℃～38℃的恒溫水浴振蕩器中培養(yǎng)20h～22h；

五、終止酶反應：向試驗組的具塞比色管中加入甲醛溶液終止酶反應，混合均勻，然后和空白組一起在轉速為4000rpm～4500rpm的條件下離心5min～8min，棄去上清液；

六、比色分析：向步驟五的試驗組和空白組的具塞比色管中分別加入質量分數為80％的丙酮溶液，分別將兩支具塞比色管底部的沉積物攪拌混合均勻，然后放入溫度為36℃～38℃的恒溫水浴振蕩器萃取10min，然后分別將兩支具塞比色管在轉速為4000rpm～4500rpm的條件下離心5min～8min，將試驗組的下層沉積物在溫度為75℃～80℃的條件下烘干6h～6.5h，稱量干重m，分別對離心后的試驗組和空白組的上層清液在紫外可見分光光度計上于485nm處測量吸光度A₁和A₂，A₁為試驗組的吸光度，A₂為空白組的吸光度；所述的質量分數為80％的丙酮溶液的體積是步驟二中Tris-HCL緩沖溶液、質量分數為0.36％的Na₂SO₃溶液、濃度為0.1mol/L的葡萄糖溶液和體積濃度為0.4％的TTC溶液體積之和的1.5倍；

七、計算TTC-脫氫酶活性：將步驟六得到的A₁和A₂做差，即A₁-A₂得到的差值代入步驟一的TF標準曲線中得到TF濃度Y，根據如下公式計算TTC-脫氫酶活性C，

C＝Y×H/m×d，

式中的H為步驟六中加入的質量分數為80％的丙酮溶液的體積，單位是mL，

C的單位是μg/(gdw·h)，

Y的單位是μg/mL，

m為步驟六中試驗組的下層沉積物的干重，單位是g，

d是步驟四中的培養(yǎng)時間，單位是h。

2.根據權利要求1所述的一種原位測定飲用水生物活性炭TTC-脫氫酶活性的方法，其特征在于步驟一中繪制TF標準曲線是按以下步驟進行的：

1)分別吸取1mL、2mL、3mL、4mL、5mL和6mL的TTC標準使用液放入6個50mL容量瓶中，用水定容，分別配置成20μg/mL、40μg/mL、60μg/mL、80μg/mL、100μg/mL和120μg/mL的TTC溶液；所述的TTC標準使用液的制備方法為：稱取100mgTTC固體，溶解定容至100m中容量瓶，得到TTC標準使用液；

2)取7支試管，分別加入2mL的Tris-HCL緩沖液，再向其中的6支試管中分別加入1mL步驟(1)中不同濃度的TTC溶液，第7支試管加入1mL無氧水作為對照，然后向7支試管中加入1mL的質量分數為10％的硫化鈉溶液，將7支試管置入37℃恒溫搖床中振蕩30min，使TTC全部還原生成紅色的TF；所述的無氧水的制備方法為：取0.36g亞硫酸鈉溶解于水，然后定容至100mL的容量瓶中，得到無氧水；

3)再向7支試管中加入6mL的丙酮溶液，穩(wěn)定5分鐘，然后將上述7種溶液直接在波長為485nm處測吸光度，取吸光度值做橫坐標，TF濃度做縱坐標，繪出TF標準曲線。