[發明專利]一種測定賽檸檬石榴皮中五種類黃酮的方法

有效

• 申請號: 201710459731.6
• 申請日: 2017-06-16
• 公開（公告）號: CN107132295B
• 公開（公告）日: 2020-09-25
• 發明（設計）人: 孟新濤;潘儼;魏健;張婷;李德華;譚歸;朱麗娜;邵文志
• 申請（專利權）人: 新疆農業科學院農產品貯藏加工研究所
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/74;G01N30/86
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

1.一種測定賽檸檬石榴皮中五種類黃酮物質的方法，其特征在于，具體采用以下技術步驟：

（1）黃酮類化合物的提取：將賽檸檬石榴皮洗凈，50℃-60℃下用鼓風干燥箱干燥至含水量小于8%，粉碎，過60目-100目篩，稱取1.000g賽檸檬石榴皮粉末置于250mL錐形瓶中，加24mL 87％乙醇，59℃超聲37.5min，超聲功率135W，溶解濾餅，再用24mL 87%乙醇溶解超聲30min-45min，合并兩次濾液，減壓回收溶劑至干，加30％乙醇溶解，用石油醚萃取除去脂溶性色素，棄去醚層，用石油醚萃取2次，再用30％乙醇定容至50ml容量瓶，作為提取液備用；

（2）純化：將提取液與D101大孔吸附樹脂以1：2-1：10的料液比g/ml、純化溫度為25℃-45℃，上柱pH值為2.0-4.0的條件下純化，用蒸餾水洗脫除雜后，用甲醇洗脫出黃酮類化合物，收集洗脫液，置于4℃冰箱保存備用；

（3）HPLC色譜條件測定：

標準曲線的繪制：準確秤取蘆丁1.5mg、槲皮苷0.6mg、槲皮素4mg、山奈酚1.6mg、異鼠李素3mg；分別加入3mL、1.2mL、8mL、3.2mL、6mL甲醇溶解得到濃度為0.5mg/mL的標準混合液，準確吸取標準溶液，配制成不同質量濃度的溶液，其中蘆丁標準溶液的濃度梯度為0.001mg/mL、0.002 mg/mL、0.0025 mg/mL、0.006 mg/mL、0.015 mg/mL、0.02 mg/mL，槲皮苷標準溶液的濃度梯度為0.001 mg/mL、0.002 mg/mL、0.003 mg/mL、0.004 mg/mL、0.008 mg/mL、0.012 mg/mL、0.016 mg/mL，槲皮素標準溶液的濃度梯度為0.001 mg/mL、0.005 mg/mL、0.01 mg/mL、0.015 mg/mL、0.02 mg/mL、0.025 mg/mL、0.03 mg/mL，山奈酚標準溶液的濃度梯度為0.001 mg/mL、0.002 mg/mL、0.003 mg/mL、0.004 mg/mL、0.008mg/mL、0.012 mg/mL、0.016 mg/mL，異鼠李素標準溶液的濃度梯度為0.001 mg/mL、0.002 mg/mL、0.003 mg/mL、0.004 mg/mL、0.008mg/mL、0.012 mg/mL、0.016 mg/mL，每次吸樣量為20μL，經過高效液相色譜檢測，以峰面積為橫坐標，質量濃度為縱坐標，繪制標準曲線；

黃酮類化合物含量的測定：將步驟（2）純化后提取液過0.22μm有機膜，進樣量20μL，用高效液相色譜儀檢測，色譜柱采用C18柱，流動相為甲醇和甲酸，其比例范圍為40：60-60：40，甲醇的濃度為98%-100%，甲酸的濃度為0.2%-2%；流動相經0.45μm濾膜過濾，并經超聲波脫氣，流速：0.5ml/min-1.0ml/min，進樣量20μL，柱溫30℃-40℃，運行5min，紫外檢測器檢測波長采用280mm或320mm或360mm，將色譜圖積分后記錄峰面積，利用各自標準曲線方程計算蘆丁、槲皮苷、槲皮素、山奈酚、異鼠李素的質量濃度。

2.如權利要求1所述的一種測定賽檸檬石榴皮中五種類黃酮物質的方法，其特征在于，所述的料液比g/ml為1：5，上柱pH值為4.0，純化溫度為30℃。