[發(fā)明專利]一種中性三七多糖的提取純化方法及促進細胞增殖藥理活性研究與應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710459344.2
• 申請日: 2017-06-16
• 公開（公告）號: CN107286265B
• 公開（公告）日: 2018-08-10
• 發(fā)明（設計）人: 陳彤
• 申請（專利權）人: 云南多糖生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00;C11D9/02;C11D9/38;C11D9/26;C11D9/50;A61K8/73;A61K8/02;A61K31/715;A61Q19/00;A61Q11/00;A61Q19/10;A61P1/02;A61P7/04;A6
• 代理公司: 北京馳納智財知識產權代理事務所(普通合伙) 11367
• 代理人: 單晶

1.一種中性三七多糖在制備促進牙周膜干細胞、成骨細胞以及人皮膚表皮細胞增殖方面的藥物的應用，所述中性三七多糖采用提取過三七皂苷的三七廢渣為原料，其特征在于：包括以下步驟：

(1)水提醇沉法提取三七粗多糖；

(2)DEAE Sepharose Fast Flow陰離子交換層析及透析法純化粗多糖，冷凍干燥法得到中性三七多糖PNPS I及酸性三七多糖PNPS II、酸性三七多糖PNPS III、酸性三七多糖PNPS IV、酸性三七多糖PNPS V凍干粉。

2.根據權利要求1所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述步驟(1)中水提醇沉法提取三七粗多糖具體方法為：取提取過三七總皂苷的廢渣，加入水，沸水浴煮，收集濾液，離心，取上清液；旋轉濃縮后，靜置，離心，棄沉淀，緩慢加入無水乙醇，邊加邊攪拌，放置后，抽濾得沉淀；乙醇洗滌沉淀，將乙醇揮發(fā)干后用適量水溶解，離心，收集上清液，加入無水乙醇，放置后，抽濾得沉淀，乙醇洗滌沉淀，烘箱烘干，即得三七粗多糖。

3.根據權利要求1所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述步驟(2)中DEAESepharose Fast Flow陰離子交換層析及透析法純化粗多糖的方法包括裝柱、平衡、上樣、洗脫、透析和冷凍干燥。

4.根據權利要求3所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述裝柱的具體方法為：加入乙醇，抽濾，用水配成勻漿，采用濕法裝柱，用玻璃棒引導勻漿沿柱內壁緩慢倒入柱內；打開柱子出液口，使凝膠在柱內自由沉降，用水清洗層析柱邊沿。

5.根據權利要求4所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述濕法裝柱的具體方法為：柱子塞入棉花，柱內加入蒸餾水并保持一小段液位，玻璃棒按壓棉花祛除氣泡。

6.根據權利要求3所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述平衡的具體方法為：蒸餾水過濾膜，用多倍量體積水以沖洗柱子，直到流出液電導率和pH不變，平衡48小時。

7.根據權利要求3所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述上樣的具體方法為：三七粗多糖溶于少量蒸餾水中，離心，上清液過濾，上樣；上樣時，將層析柱出液口打開，待蒸餾水下移至柱床表面時，關閉出液口，用滴管沿柱內壁加入三七多糖溶液，打開出液口，讓樣品液全部流入柱子內部，并用少量蒸餾水沖洗柱內壁，然后進行洗脫。

8.根據權利要求3所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述洗脫的具體方法為：分別用水和不同濃度的NaCl溶液梯度洗脫，蒽酮‐硫酸法檢測，直至無多糖檢出，作DEAESepharose Fast Flow陰離子交換層析柱洗脫曲線圖，分別合并各流出峰溶液，中性三七多糖用水洗脫，酸性三七多糖用不同濃度NaCl溶液洗脫。

9.根據權利要求3所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述透析的具體方法為：分別將濃縮后的洗脫液裝于透析袋中，用透析夾夾緊透析袋兩端，放于蒸餾水中透析36h，每4h換一次水。

10.根據權利要求9所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述透析袋在使用之前需要剪成小段，每段10cm，放于蒸餾水中煮沸30min，洗三遍后再煮沸10min，之后蒸餾水洗干凈；第二次用2％NaHCO₃和1mmol/L EDTA煮沸后清洗。

11.根據權利要求3所述的中性三七多糖的應用，其特征在于：所述冷凍干燥的具體方法為：將洗脫液收集于離心管，‐40℃預凍12h，放于冷凍干燥機冷凍干燥36h‐38h，取出后加入蒸餾水溶解，搖勻；‐40℃預凍12h，放于冷凍干燥機24h；取出后封口于干燥器中保存。