[發明專利]玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡及其制備方法

在審

• 申請號: 201710456905.3
• 申請日: 2017-06-16
• 公開（公告）號: CN107422124A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: 王琳;魏照征;閆俊杰
• 申請（專利權）人: 普菲特益斯生物科技（北京）有限公司
• 主分類號: G01N33/64
• 分類號: G01N33/64;G01N33/577;G01N33/558;G01N33/533
• 代理公司: 深圳市中原力和專利商標事務所(普通合伙)44289
• 代理人: 王詩捷

【技術領域】

本發明涉及生物檢測技術領域，具體涉及一種玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡及其制備方法。

【背景技術】

玉米赤霉烯酮(Zearalenone)，又稱F-2毒素，是玉米赤霉菌的代謝產物。它首先從有赤霉病的玉米中分離得到，玉米赤霉烯酮其產毒菌主要是鐮刀菌屬(Fusarium)的菌侏，如禾谷鐮刀菌(F.graminearum)和三線鐮刀菌(F.tricinctum)。玉米赤霉烯酮主要污染玉米、小麥、大米、大麥、小米和燕麥等谷物。其中玉米的陽性檢出率為45％，最高含毒量可達到2909mg/kg；小麥的檢出率為20％，含毒量為0.364～11.05mg/kg。玉米赤霉烯酮的耐熱性較強，110℃下處理1h才被完全破壞。

玉米赤霉烯酮具有雌激素作用，主要作用于生殖系統，可使家畜，家禽和實驗小鼠產生雌性激素亢進癥。妊娠期的動物(包括人)食用含玉米赤霉烯酮的食物可引起流產、死胎和畸胎。食用含赤霉病麥面粉制作的各種面食也可引起中樞神經系統的中毒癥狀，如惡心、發冷、頭痛、神智抑郁和共濟失調等。

目前，玉米赤霉烯酮一般采用液相和氣相色譜的方法進行測定。該測定方法具有檢測周期長、操作復雜、靈敏度低、儀器設備昂貴等缺點，無法應用于大批量樣品的篩查工作。

因此有必要提供一種新的技術解決上述技術問題。

【發明內容】

本發明的目的是克服上述技術問題，提供一種操作簡單、靈敏度高、線性范圍寬等優點的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡。

本發明的技術方案是：

一種玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡，包括底板、設于所述底板且依次搭接的樣品墊、玻璃纖維膜、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述玻璃纖維膜上涂布有由熒光微球標記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體，所述硝酸纖維素膜上間隔設置有檢測線和質控線，其中所述檢測線由玉米赤霉烯酮偶聯抗原包被于所述硝酸纖維素膜上形成，所述質控線由羊抗鼠IgG包被于所述硝酸纖維素膜上形成。

本發明還提供一種玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡的制備方法。包括如下步驟：

步驟S1：采用熒光微球對玉米赤霉烯酮單克隆抗體進行標記，并將其噴涂于玻璃纖維膜上；

步驟S2：將玉米赤霉烯酮偶聯抗原包被于硝酸纖維素膜，形成檢測線；將羊抗鼠IgG包被于硝酸纖維素膜，形成質控線；

步驟S3：在粘性底板上依次搭接樣品墊、噴涂有由熒光微球標記的玉米赤霉烯酮單克隆抗體的玻璃纖維膜、包被有檢測線和質控線的硝酸纖維素膜及吸水墊，并裁切形成玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡。

優選的，步驟S1包括熒光微球活化、熒光微球標記抗體、標記抗體封閉、標記抗體噴涂于玻璃纖維膜步驟。

優選的，所述熒光微球與所述玉米赤霉烯酮單克隆抗體的質量比為10:1。

優選的，所述熒光微球的粒徑為50-300nm。

優選的，所述標記抗體封閉步驟所用封閉液為濃度7.5％甘氨酸和10％牛血清白蛋白。

優選的，步驟S2中，所述羊抗鼠IgG的濃度為1mg/ml；所述玉米赤霉烯酮偶聯抗原的濃度為2mg/ml。

優選的，所述檢測線和所述質控線的間隔為5mm。

與相關技術相比，本發明提供的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡及其制備方法，有益效果在于：

一、本發明提供的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡為免疫層析檢測卡，通過熒光微球標記玉米赤霉烯酮單克隆抗體，檢測玉米赤霉烯酮的操作方便、檢測速度快；所述玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡的線性范圍為10-300μg/kg。

二、所述玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡的制備方法中，將熒光微球表面進行活化處理后，采用化學偶聯方法來標記抗體，形成抗體與熒光微球的穩定結合，進一步保證檢測結果精度。

【附圖說明】

圖1為本發明提供的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡的結構示意圖；

圖2為本發明提供的玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡的標準曲線圖。

【具體實施方式】

下面將結合附圖和實施方式具體實施方式對本發明作進一步說明。

以下詳細闡述所述玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡的制備方法。為方便描述，將在所述玉米赤霉烯酮熒光定量檢測卡的制備方法過程中應用到的部分試劑的簡稱說明如下，在具體描述其制備方法時對應的試劑采用簡稱。

2-(N-嗎啡啉)乙磺酸緩沖液，簡稱MES緩沖液；

1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽，簡稱EDC；

N-羥基琥珀酰亞胺，簡稱NHS；

4-羥乙基哌嗪乙磺酸緩沖液，簡稱HEPES緩沖液；