[發(fā)明專利]AQP1過表達(dá)質(zhì)粒及其在影響乳腺癌細(xì)胞耐藥性上的用途

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710456822.4
• 申請(qǐng)日: 2017-06-16
• 公開（公告）號(hào): CN107299109A
• 公開（公告）日: 2017-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 馬勇杰;谷峰;付麗;楊麗敏;種微
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津市腫瘤醫(yī)院
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/62;C12N5/10;A61K48/00;A61K38/17;A61P35/00
• 代理公司: 天津市宗欣專利商標(biāo)代理有限公司12103
• 代理人: 孫喬喬

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及DNA重組技術(shù)，具體涉及一種AQP1過表達(dá)質(zhì)粒及其在影響乳腺癌細(xì)胞耐藥性上的用途。

背景技術(shù)

水通道蛋白（aquaporins, AQPs）是一類小分子跨膜蛋白，廣泛分布于原核生物和真核生物的細(xì)胞膜中，能夠介導(dǎo)水和其他溶質(zhì)小分子的快速跨膜轉(zhuǎn)運(yùn)。水通道蛋白家族共有13個(gè)成員，即AQP0-AQP12，可以被劃分為3大類：（1）傳統(tǒng)水通道蛋白，包括AQP0，AQP1，AQP2，AQP4，AQP5，AQP6和AQP8，這類水通道蛋白只對(duì)水有滲透性；（2）甘油水通道蛋白，包括AQP3，AQP7，AQP9和AQP10，這類蛋白不止對(duì)水分子有通透作用，還對(duì)甘油，尿素和一些單羧酸鹽有通透作用；（3）超水通道蛋白，包括AQP11和AQP12，該類蛋白質(zhì)存在于細(xì)胞質(zhì)中，可能參與細(xì)胞內(nèi)的水轉(zhuǎn)運(yùn)、細(xì)胞器體積和內(nèi)囊體水平衡的調(diào)節(jié)。水通道蛋白廣泛分布于泌尿系統(tǒng)，消化系統(tǒng)，呼吸系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)，參與調(diào)節(jié)尿液濃縮和稀釋，腺體分泌，脂肪代謝，腦脊液形成，神經(jīng)信號(hào)傳導(dǎo)等，AQPs功能失常與多種疾病相關(guān)，比如腎性尿崩癥，腦水腫，脂肪肝等。并且隨著研究的深入，人們發(fā)現(xiàn)水通道蛋白與腫瘤的發(fā)生發(fā)展也具有密不可分的關(guān)系。

AQP1是最早被發(fā)現(xiàn)的水通道蛋白，AQP1基因位于人染色體7p14，分子大小為28KD。AQP1在細(xì)胞膜上主要以四聚體形式存在，每個(gè)單體是1條含269個(gè)氨基酸殘基的肽鏈，每個(gè)單體均有獨(dú)立的水轉(zhuǎn)運(yùn)功能。AQP1單體包含6個(gè)跨膜螺旋（Ⅰ-Ⅵ）和5個(gè)連接螺旋的環(huán)（A-E），其中A環(huán)，C環(huán)和E環(huán)定位于胞質(zhì)外側(cè)，B環(huán)和D環(huán)及肽鏈的N末端和C末端均位于胞質(zhì)內(nèi)側(cè)。胞內(nèi)側(cè)的B環(huán)與胞外側(cè)的E環(huán)分別含有高度保守的天冬酰胺-脯氨酸-丙氨酸（NPA）序列，各自折疊成短的α螺旋嵌入細(xì)胞膜內(nèi)且相對(duì)形成180°，構(gòu)成運(yùn)水通道的核心部位，并與靠近四聚體中心的4個(gè)α螺旋構(gòu)成完整通道，形成“沙漏模型”結(jié)構(gòu)。AQP1能選擇性地通過大量的水，而不允許其它離子或分子通過。

在泌尿系統(tǒng)中，AQP1分布于腎臟近曲小管的頂質(zhì)膜和基底膜，主要參與近曲小管的液體重吸收過程。在神經(jīng)系統(tǒng)中，AQP1在脈絡(luò)上皮細(xì)胞表達(dá)，參與腦脊液的形成與流動(dòng)，在脊髓背角淺層神經(jīng)元中，AQP1參與神經(jīng)信號(hào)的傳導(dǎo)。在消化系統(tǒng)中，AQP1在肝細(xì)胞，胰細(xì)胞等細(xì)胞中均有表達(dá)，參與脂肪代謝，腺體分泌等過程。

近年來有研究表明，AQP1被發(fā)現(xiàn)在多種腫瘤細(xì)胞中高表達(dá)，包括膽管癌、膀胱癌、腦瘤、乳腺癌、宮頸癌、結(jié)腸癌、肺癌、鼻咽癌、前列腺癌等，并參與到腫瘤發(fā)生發(fā)展的多個(gè)過程。AQP1在腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲過程中起重要作用，還可以調(diào)節(jié)腫瘤的血管生成。

由于水通道蛋白本身對(duì)于液體的分泌與吸收的作用，加上其在腫瘤進(jìn)展過程中有著不可替代的作用，所以水通道蛋白成為腫瘤新的藥物治療靶點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明所提出的一種AQP1過表達(dá)質(zhì)粒及其在影響乳腺癌細(xì)胞耐藥性上的用途，目的在于提供一種新的乳腺癌細(xì)胞表阿霉素敏感性的影響因素，為下一步研制抗癌藥物，尤其是乳腺癌，奠定理論基礎(chǔ)。

本發(fā)明是按照以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的。

一種AQP1過表達(dá)質(zhì)粒，在PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro質(zhì)粒上整合3×flag核苷酸序列及AQP1核苷酸序列。

所述3×flag核苷酸序列前端設(shè)置有ATG起始密碼子。

所述AQP1過表達(dá)質(zhì)粒在乳腺癌細(xì)胞中過表達(dá)。

一種上述AQP1過表達(dá)質(zhì)粒在影響乳腺癌細(xì)胞耐藥性上的用途。

AQP1過表達(dá)質(zhì)粒增強(qiáng)乳腺癌細(xì)胞對(duì)表阿霉素的敏感性。

本發(fā)明獲得了如下有益效果：

本發(fā)明為研究AQP1影響腫瘤細(xì)胞化療藥物敏感性的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)，同時(shí)本發(fā)明提供了一種新的影響乳腺癌細(xì)胞表阿霉素敏感性的因素，也為下一步研制抗癌藥物，尤其是乳腺癌，奠定理論基礎(chǔ)，具有廣闊的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1是本發(fā)明PCDH-P-3×flag-AQP1重組質(zhì)粒圖譜；

圖2是本發(fā)明western bloting檢測(cè)PCDH-P-3×flag-AQP1重組質(zhì)粒表達(dá)情況圖；

圖3是本發(fā)明PCDH-P-3×flag-AQP1慢病毒質(zhì)粒對(duì)乳腺癌細(xì)胞表阿霉素敏感性的影響圖。

具體實(shí)施方式

為了進(jìn)一步闡釋本發(fā)明的技術(shù)方案及其所實(shí)現(xiàn)的技術(shù)效果，下面將結(jié)合附圖及實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的說明。

1.PCDH-P-3×flag-AQP1重組質(zhì)粒的構(gòu)建

原始質(zhì)粒：PCDH-CMV-MCS-EF1-Puro（購(gòu)自SBI公司）