[發明專利]一種大黃魚干擾素IFN1啟動子、核酸構建體、細胞及其制備方法和用途

在審

• 申請號: 201710456729.3
• 申請日: 2017-06-16
• 公開（公告）號: CN107326025A
• 公開（公告）日: 2017-11-07
• 發明（設計）人: 鄒鵬飛;李瑩;姚翠鸞;孫慶學;張晴
• 申請（專利權）人: 集美大學;廈門大學嘉庚學院
• 主分類號: C12N15/113
• 分類號: C12N15/113;C12N15/11;C12N15/10;C12N15/85;A01K67/027
• 代理公司: 廈門市精誠新創知識產權代理有限公司35218
• 代理人: 姜成康

技術領域

本發明涉及基因工程技術領域，特別是涉及一種大黃魚干擾素IFN1啟動子、核酸構建體、細胞及其制備方法和用途。

背景技術

干擾素(interferon,IFN)是一類重要的細胞因子，可通過與細胞膜上的相應受體結合啟動細胞信號轉導，具有多種生物學功能，如激活抗病毒基因參與機體抗病毒免疫、調節免疫應答、抗腫瘤等(Samuel CE.Antiviral actions of interferons[J].Clin Microbiol Rev,2001；14:778–809)。哺乳動物中的研究根據基因序列、功能特性和受體類型的不同將IFN分為三類：I型干擾素，主要由IFN-α和IFN-β組成，II型干擾素為IFN-γ，III型干擾素為IFN-λ(Pestka S,Krause CD,Walter MR.Interferons,interferon-like cytokines,and their receptors[J].Immunol Rev,2004；202:8–32)。其中，I型干擾素具有顯著的抑制病毒復制的功能，并可誘導多種抗病毒基因的表達，包括蛋白激酶R(Protein Kinase R,PKR)、2′,5′-寡腺苷酸合成酶(2′,5′-Oligoadenylate synthetase,OAS)和Mx蛋白(Mx protein)，在機體的抗病毒免疫反應中發揮重要作用。鑒于I型干擾素在宿主抗病免疫反應中的重要性，研究其轉錄調控機制對于揭示機體的免疫反應及細胞信號轉導通路具有重要意義。哺乳動物中的相關研究已開發出人IFN-β啟動子熒光素酶報告基因系統，研究目標基因的功能及其介導的相關信號通路(Sabbah A,Chang TH,Harnack R,et al.Activation of innate immune antiviral responses by Nod2[J].Nat Immunol,2009；10:1073–80)。

目前，I型干擾素已在多種硬骨魚類中得到克隆，包括斑馬魚(Danio rerio)、斑點叉尾鮰(Ictalurus punctatus)、大西洋鮭(Salmo salar)和虹鱒(Oncorhynchus mykiss)等。與哺乳動物中干擾素的命名規則不同的是，硬骨魚類I型干擾素是根據其基因組中的位置，按照阿拉伯數字順序來命名(Robertsen B,Bergan V, T,et al.Atlantic salmon interferon genes:cloning,sequence analysis,expression,and biological activity[J].J Interferon Cytokine Res,2003；23:601–12)。此外，在斑馬魚中的研究中已經克隆了I型干擾素的啟動子序列，構建了熒光素酶報告基因質粒，并成功用于免疫相關基因功能的研究(Sun F,Zhang YB,Liu TK,et al.Fish MITA serves as a mediator for distinct fish IFN gene activation dependent on IRF3or IRF7[J].J Immunol,2011；187:2531–9)。

大黃魚是我國重要的海水經濟魚類，對其抗病免疫基礎的研究不僅可以豐富魚類免疫學的認識，并可為疾病防控與抗病分子模塊育種奠定基礎，因而獲得廣泛關注。目前對魚類干擾素IFN1基因的表達調控機制，尤其是有關干擾素IFN1所涉及的細胞信號轉導通路調控網絡的相關研究依然較匱乏。

發明內容

本發明的目的在于提供一種大黃魚干擾素IFN1啟動子。

為實現上述目的，本發明提供一種大黃魚干擾素IFN1啟動子，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID NO：1所示，或者為與SEQ ID NO：1互補的核苷酸序列。

本發明提供一種核酸構建體，包含所述的IFN1啟動子，與IFN1啟動子可操作連接的基因序列，其中所述IFN1啟動子與所述基因序列來源相同或者不同。

本發明提供一種載體，其特征在于：所述載體含有所述的IFN1啟動子或所述的核酸構建體。

進一步，所述載體為所述的IFN1啟動子或所述的核酸構建體與真核表達載體經重組得到的重組載體；優選的，真核表達載體為pGL4.17質粒。

本發明提供一種重組細胞，其特征在于：所述細胞含有所述的IFN1啟動子或所述的核酸構建體或所述的載體，所述重組細胞為魚類細胞或哺乳動物細胞；優選的，魚類細胞為EPC細胞。