[發明專利]一種酶法制備S-腺苷甲硫氨酸的方法

有效

• 申請號: 201710452799.1
• 申請日: 2017-06-15
• 公開（公告）號: CN109136311B
• 公開（公告）日: 2022-07-26
• 發明（設計）人: 劉珊珊;劉輝;周穩文
• 申請（專利權）人: 安徽古特生物科技有限公司
• 主分類號: C12P19/40
• 分類號: C12P19/40
• 代理公司: 北京中珒知識產權代理事務所(特殊普通合伙) 11806
• 代理人: 王中

1.一種酶法制備S-腺苷甲硫氨酸的方法，其特征在于，包括以下步驟：

(1)在反應罐中生成SAM：

在反應罐中，100L的反應體系為含有底物2.5kg甲硫氨酸、3.5kg腺苷，以及2.5kg六偏磷酸鈉、0.37kg氯化鉀、1.0kg六水氯化鎂、0.3kg一水氯化錳和0.43kg磷酸氫二鈉的溶液，配制時均勻攪拌防止出現沉淀，調節pH值至8.0，在反應體系中添加MAT酶600U/L、PPK酶300U/L、ADK酶100U/L、PAP酶300U/L以及AK酶500U/L開始反應，所添加酶均為粗酶液；反應期間控制pH值為8.0，溫度為37℃；

反應8小時后，高效液相色譜檢測SAM的生成量；

(2)在過濾器中分離酶：

通過超濾方法，將步驟(1)的反應液經過過濾器分離混合酶，過濾器內裝膜包，濾出液為分離出酶之后的反應液；

(3)分離產物SAM和其它物質：

使用鹽酸調節濾出液的pH值至4.0，在離子交換柱中通過D113大孔陽離子交換樹脂，溶液中的SAM、氨基酸等陽離子被吸附，穿出液中主要含有ATP、ADP以及AMP；

使用0-0.8M NaCl梯度洗脫陽離子交換樹脂上的SAM；

(4)反應罐中生成SAM的連續反應，即步驟(1)的連續反應：

將步驟(2)中分離出的酶經由過濾器的回流口添加至反應罐，并添加原酶量5-10％的新酶進行反應；將步驟(3)中離子交換穿出液加入至反應罐配制溶液，反應液配制方法同上述步驟(1)，腺苷加入量減少75％；

在37℃、pH為8.0的條件下進行生成SAM的連續反應；8小時后，HPLC檢測SAM的生成量。