[發(fā)明專利]一種治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑的檢測方法

有效

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• 申請日: 2017-06-15
• 公開（公告）號: CN107315061B
• 公開（公告）日: 2019-01-25
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 王志鋒;楊軍;雷文貴;張濤;蘇海燕;侯紅霞
• 申請（專利權(quán)）人: 甘肅蘭藥藥業(yè)有限公司
• 主分類號: G01N30/90
• 分類號: G01N30/90;G01N30/02
• 代理公司: 甘肅省知識產(chǎn)權(quán)事務(wù)中心 62100
• 代理人: 馬英

1.一種治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑的檢測方法，其特征在于，該檢測方法包括茜芷中藥制劑的鑒別方法與含量測定方法；鑒別是對茜芷中藥制劑中的茜草、大葉茜草素、羥基茜草素、三七、三七皂苷、人參皂苷、白芷、歐前胡素、異歐前胡素、川牛膝、杯莧甾酮的薄層色譜鑒別；所述鑒別方法為：

性狀∶所述治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑呈褐色，氣芳香，味辛、微苦；

鑒別：

（1）茜芷中藥制劑處方中鑒定茜草的方法是∶取相當(dāng)于生藥材15.25～20.55g的茜芷中藥制劑，除去包衣，研細(xì)，加入乙醚20～40ml,放置1小時，時時振搖提取，濾過，濾液揮去，殘渣加乙酸乙酯1ml使溶解，作為茜草供試品溶液備用；另取茜草對照藥材粉末0.8～1.5g，同茜草供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl,分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為8～15∶4～10∶1～3∶4～10的環(huán)己烷-丙酮-二乙胺-水為展開劑展開，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

取大葉茜草素為對照品，加入甲醇制成1ml含大葉茜草素0.1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及所述茜草供試品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為20～25∶3～ 6∶0.1 ～ 0.8石油醚- 乙酸乙酯- 冰醋酸為展開劑展開，取出，晾干，噴以二硝基苯肼乙醇試液，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；該步驟使用的石油醚為60 ～ 90℃；

取羥基茜草素為對照品，加入甲醇制成每1ml含羥基茜草素40μg，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液及所述茜草供試品溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為15～20∶5～12∶1～2乙酸乙酯-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

（2）茜芷中藥制劑處方中鑒定三七的方法是∶取相當(dāng)于生藥材13.6～18.6g的茜芷中藥制劑，除去包衣，研細(xì)，加入5%甲酸的甲醇溶液15～30ml，加熱回流30分鐘，放冷，濾過，濾液揮去，殘渣加甲醇2ml使溶解，作為三七供試品溶液備用；另取三七對照藥材粉末0.8～1.5g，同三七供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為8～12∶6～9∶1～3苯-乙酸乙酯-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

取三七皂苷R₁和三七皂苷Rg₁對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和三七供試品溶液各4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5～12∶3～7∶0.5～1.5氯仿-甲醇-冰乙酸的上層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜對應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

取人參皂苷Rb1對照品和人參皂苷Re對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和三七供試品溶液各3μl分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為10～18∶35～45∶17～25∶8～12三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水10℃以下放置的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以硫酸溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的顏色斑點；

（3）茜芷中藥制劑處方中鑒定白芷的方法是∶取相當(dāng)于生藥材14.6～19.8g的茜芷中藥制劑，除去包衣，研細(xì)，加石油醚10～40ml，振搖提取30分鐘，濾過，濾渣備用，濾液揮去石油醚至2ml，作為白芷供試品溶液備用；另取白芷對照藥材0.4～0.9g，加石油醚（60～90℃）5～10ml，振搖提取30分鐘，靜置，上清液作為對照藥材溶液, 照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為12～20∶2～5∶0.1～0.8石油醚-乙酸乙酯-冰醋酸為展開劑，在 25℃以下展開，取出，晾干，置365nm紫外燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；該步驟使用的石油醚為60～ 90℃；

取歐前胡素對照品和異歐前胡素對照品，加入乙酸乙酯制成每1ml含有1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取對照品溶液和白芷供試品溶液各4μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為5～9∶2～5∶0～1石油醚-乙醚 -甲酸為展開劑，在25℃以下展開，取出，晾干，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；該步驟使用的石油醚為30～60℃；

（4）茜芷中藥制劑處方中鑒定川牛膝的方法是∶取相當(dāng)于生藥材12.7～18.9g的茜芷中藥制劑，加乙醇30～50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醚15～25ml，振搖提取，揮干，殘渣加乙酸乙酯1ml 使溶解，作為川牛膝供試品溶液；另取川牛膝對照藥材1～4g，加乙醇20～40ml，同川牛膝供試品溶液制備方法制成對照藥材溶液；照薄層色譜試驗，吸取川牛膝供試品溶液6～8μl、對照藥材溶液3～5μl，分別點于同一硅膠G 薄層板上，以體積比為10～25 ∶8～18 ∶1～3甲苯∶乙酸乙酯∶甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以體積比為1∶1％三氯化鐵∶1％鐵氰化鉀的混合溶液加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

取杯莧甾酮對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取川牛膝供試品溶液5～10μl和對照品溶液5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以體積比為13～18∶3～5∶1～2氯仿-丙酮-甲酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，置紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點；

所述茜芷中藥制劑的含量測定方法，包括采用高效液相色譜法測定茜芷中藥制劑中白芷所含歐前胡素的量；

色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗∶

流動固定相∶選用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料的色譜柱 ；

流動相∶以體積比為 （30∶70）～（65∶35）的組分 A 和組分 B 構(gòu)成的混合溶劑作為流動相 ；所述組分 A 是體積比為5∶1的乙腈和甲醇溶液，組分 B是0.01 ～ 0.05mol/L 磷酸二氫鉀溶液或磷酸二氫鈉溶液或磷酸二氫銨溶液，每1000ml流動相加入3ml的三乙胺，用磷酸溶液調(diào)節(jié) pH 值至3.0 ～ 4.5 ；

檢測波長∶ 275 ～ 315nm ；

柱溫∶25 ～ 45℃ ；

流速∶流速 0.8 ～ 1.2ml/min ；

供試品溶液的制備∶取相當(dāng)于生藥材 17.56g的茜芷中藥制劑，精密稱定，研細(xì)，取1.8g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%的甲醇50ml,稱定重量，超聲提取30 ～ 40分鐘，放冷，再稱定重量，用50%甲醇補足減失的重量，濾過，棄去初濾液，剩余的濾液通過孔徑為0.45μm微孔濾膜濾過，即得供試品溶液；

對照品溶液的制備∶精密稱取歐前胡素對照品，精密稱定，加甲醇制成每1ml含有20μg的溶液，搖勻，即得；

測定法∶分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所示的一種治療婦女子宮出血的茜芷中藥制劑的檢測方法，其特征在于：所述色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗中組分A和組分 B以體積比為45∶55混合后作為流動相且每1000ml加入3ml的三乙胺，用磷酸溶液調(diào)節(jié) pH 值至 4.0 ；所述組分 A 是體積比為5∶1的乙腈和甲醇溶液，所述組分 B 是0.02mol/l 磷酸二氫鉀溶液；所述檢測波長300nm ；所述柱溫為30℃ ，所述流速為1.0ml/min。