[發明專利]一種人類活性免疫細胞凍存液及其凍存方法

在審

• 申請號: 201710452355.8
• 申請日: 2017-06-15
• 公開（公告）號: CN107094754A
• 公開（公告）日: 2017-08-29
• 發明（設計）人: 王海濤;周強;王斌;夏玉軍;周長景;王科嘉
• 申請（專利權）人: 藍石科技有限公司
• 主分類號: A01N1/02
• 分類號: A01N1/02
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙)11435
• 代理人: 劉子成

1.一種人類活性免疫細胞凍存液，其特征在于：包含二甲基亞砜、乙酰胺、右旋糖酐、無血清細胞培養基，其中，所述的無血清細胞培養基為SAF-CHO-G-001細胞培養基。

2.根據權利要求1所述的一種人類活性免疫細胞凍存液，其特征在于：按體積百分比計算，包含5～10％二甲基亞砜、5～10％乙酰胺、5～10％右旋糖酐、70～85％無血清細胞培養基。

3.根據權利要求2所述的一種人類活性免疫細胞凍存液，其特征在于：按體積百分比計算，包含8％二甲基亞砜、8％乙酰胺、8％右旋糖酐、76％無血清細胞培養基。

4.根據權利要求2所述的一種人類活性免疫細胞凍存液，其特征在于：按體積百分比計算，包含10％二甲基亞砜、5％乙酰胺、10％右旋糖酐、75％無血清細胞培養基。

5.一種權利要求1所述的人類活性免疫細胞的凍存方法，其特征在于按照以下步驟進行：

(1)將二甲基亞砜、乙酰胺、右旋糖酐、無血清細胞培養基按比例混勻制得凍存液；

(2)將凍存液放入程序降溫儀中降溫至4℃并維持；

(3)取培養好的人體活性免疫細胞，轉移至離心管中，1800～2000rpm條件下離心5～8分鐘，棄上清，沿離心管壁緩慢滴加步驟(2)中的凍存液，滴加程序為：前3min以0.3ml/min速度滴加，后5min以0.6ml/min速度滴加，余下的凍存液以0.75ml/min速度滴加，最終細胞密度為1×10⁵個/mL～1.5×10⁵個/mL，輕輕吹吸混勻并分裝于凍存管中；

(4)將該凍存管轉移至程序降溫儀中，按照溫度下降速度為0.1～0.3℃/min的速率將凍存管冷凍至-10℃，并維持2～4小時，然后按照溫度下降速度為0.6～1.5℃/min的速率將凍存管冷凍至-40℃，并維持2～4小時，再按照溫度下降速度為5～8℃/min的速率將凍存管冷凍至-80℃，并維持2～4小時，最后浸入液氮中長期保存。

6.根據權利要求5所述的一種人類活性免疫細胞的凍存方法，其特征在于所述的步驟(4)中的降溫程序為：按照溫度下降速度為0.1℃/min的速率將凍存管冷凍至-10℃，并維持2小時，然后按照溫度下降速度為0.8℃/min的速率將凍存管冷凍至-40℃，并維持2小時，再按照溫度下降速度為8℃/min的速率將凍存管冷凍至-80℃，并維持2小時，最后浸入液氮中長期保存。