[發明專利]一種釀酒糯高粱常規種品種或種質純度鑒定的方法

有效

• 申請號: 201710448776.3
• 申請日: 2017-06-14
• 公開（公告）號: CN107254523B
• 公開（公告）日: 2020-06-23
• 發明（設計）人: 閆松顯;王莉;涂佑能;汪地強;王和玉;趙亮
• 申請（專利權）人: 貴州茅臺酒股份有限公司
• 主分類號: C12Q1/6895
• 分類號: C12Q1/6895;C12N15/11
• 代理公司: 北京市萬慧達律師事務所 11111
• 代理人: 謝敏楠;梁順珍

本發明屬于分子生物學領域，涉及一種釀酒高粱常規種品種和種質純度鑒定的方法，該方法依據基因組簡單序列重復標記(SSR，Simple Sequence Repeats)的基本原理，根據數據庫提供信息合成特異性標記引物，利用提取的高粱品種DNA擴增并篩選分子標記位點，最終獲得“紅纓子”等釀酒高粱品種基因組特異性條帶。根據高粱品種特異性條帶圖譜取樣分析并進行統計，可以鑒定酒廠原料的種質純度。該方法操作簡便、效果明顯、可行性高。

技術領域

本發明屬分子生物學技術領域，具體涉及一種基因組分子標記技術鑒定釀酒高粱原料的應用研究，該發明涉及方法可用于不同釀酒高粱品種和種質純度的鑒定。

背景技術

隨著中國白酒釀造行業的深度調整，釀酒專用高粱發展迅速。近年來醬香酒高粱原料的需求量很大，其中貴州省的“紅纓子”高粱推廣面積最大。如何判斷專用高粱種質的真偽是酒廠實際原料收購中需要面對的一個重要問題。以往酒廠的原料鑒定常常根據理化指標含量(如總淀粉、支鏈淀粉、單寧含量等)來判定種質真偽，這種鑒定方法具有工作量較大，耗時長，鑒定靈敏度不高等因素的局限。

高粱是二倍體作物，基因組共10對染色體。高粱基因組上均勻分布著一類短的串聯重復序列，根據這些串聯重復序列兩側保守位點設計引物進行PCR擴增并電泳分析或測序，可以進行種質鑒定或遺傳多樣性分析，這是簡單序列重復標記(SSR，Simple SequenceRepeats)或微衛星(Microsatellite)標記的基本原理。通過分子標記技術構建不同釀酒高粱品種的DNA指紋圖譜，可以發掘高粱品種基因組特異位點的多態性特征，為實際的原料品種來源的鑒定提供依據。目前高粱基因組已開發出大量的SSR分子標記(http://archive.gramene.org/cmap/)，利用這種分子標記技術可以有效地解決爭議，判定高粱種質真偽。然而我國高粱常規種遺傳基礎比較狹窄，以紅纓子為代表的高粱常規種部分基因組位點間相似性很高，大部分擴增出的SSR分子標記位點條帶大小很相似，因此怎樣篩選出鑒定品種所對應的特異性SSR標記，是本發明的一個重點，也是一個難點。目前，還沒有關于釀酒高粱尤其是醬香酒用糯高粱種質分子標記技術鑒定方法的報道。綜上所述，對于釀酒高粱種質的鑒定，亟待找到合適的SSR位點以及引物，鑒定盡可能多的高粱種質類別。

發明內容

本發明的目的在于提供一組高粱的SSR分子標記位點用于高粱品種或種質純度的鑒定。

本發明的目的在于還提供一組引物，用于鑒定高粱品種或種質純度。

本發明的目的還在于提供一種高效、靈敏、應用范圍廣的高粱品種和種質純度的鑒定方法。

一方面，本發明提供了高粱的SSR分子標記位點txp36和txp287在鑒定高粱品種/種質純度中的應用

另一方面，本發明提供了高粱SSR分子標記位點的引物組，其包含兩對SSR引物：

1)txp36位點的引物，作為優選的實施方式，其由SEQ.ID NO.1所示的左引物和SEQ.ID NO.2所示的右引物組成；；

2)txp287位點的引物，作為優選的實施方式，其由SEQ.ID NO.3所示的左引物和SEQ.ID NO.4所示的右引物組成；。

另一方面，本發明還提供了上述位點以及引物組在高粱品種鑒定或者是種質純度鑒定中的應用。

作為優選的實施方式，本發明的引物組或者應用，其中，待鑒定的高粱品種為釀酒高粱，其中主要為釀酒糯高粱；或者，作為優選的實施方式，鑒定的高粱品種為紅纓子、黔高7號、黔高8號、瀘州紅1號、國窖紅1號、晉雜22號、晉雜23號、晉雜35號、晉雜103號、晉雜104號、晉糯3號、兩糯1號、遼粘3號、遼雜15號、遼雜18號、遼雜19號和遼雜37號中的一種或多種；更優選紅纓子、黔高7號、遼雜37號；尤其優選的是紅纓子，因為紅纓子的推廣面積在貴州最大，且為主要的專用釀酒品種，其鑒定具有重要的意義。