[發(fā)明專利]一種利用復(fù)合PAHs降解菌同時(shí)去除植物體內(nèi)USEPA PAHs的方法有效
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710443787.2 | 申請(qǐng)日： | 2017-06-13 |
| 公開(kāi)（公告）號(hào)： | CN107306532B | 公開(kāi)（公告）日： | 2021-09-07 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 高彥征;王建;劉娟;凌婉婷 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 南京農(nóng)業(yè)大學(xué) |
| 主分類號(hào)： | A01C1/00 | 分類號(hào)： | A01C1/00;A01G7/06;A01N63/00;A01N43/90;A01N43/38;A01N37/44;A01P21/00 |
| 代理公司： | 北京棧橋知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11670 | 代理人： | 余柯薇 |
| 地址： | 210095 *** | 國(guó)省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 利用 復(fù)合 pahs 降解 同時(shí) 去除 植物 體內(nèi) usepa 方法 | ||
1.一種利用復(fù)合PAHs降解菌同時(shí)去除植物體內(nèi)美國(guó)環(huán)保署優(yōu)先控制多環(huán)芳烴(USEPAPolycyclic Aromatic Hydrocarbons,USEPA PAHs)的方法，其特征在于：所述方法是將多種功能菌制成微生物復(fù)合功能菌劑，并加入植物吸收促進(jìn)劑、細(xì)胞分裂素6-BA或KT、生長(zhǎng)素2,4-D、半胱氨酸，制成降解劑，然后接種于植物體內(nèi)，即可降低植物體內(nèi)PAHs含量；
所述的復(fù)合功能菌是由8株降解譜不同的PAHs降解菌組成，分別是：Sphingobiumsp.RS1、Sphingobium sp.RS2、Mycobacterium sp.Pyr9、Mycobacterium sp.033、Diaphorobacter sp.Phe15、Massilia sp.Pn2、Paenibacillus sp.Phe3、Pseudomonassp.Ph6；
8株P(guān)AHs降解菌皆能夠以PAHs為唯一碳源和能源生長(zhǎng)，菌株之間無(wú)拮抗現(xiàn)象；8株P(guān)AHs降解菌具有不同的降解譜，RS1、RS2可在不同程度上降解苊稀、菲、芘；Pyr9、Phe15為菲、芘降解菌；033可降解菲、蒽、熒蒽、苯并苝；Pn2可降解萘、苊稀、菲、芘、苯并芘；Phe3可降解萘、菲、芴、熒蒽、苯并芘；Ph6可降解苊稀、菲；
所述微生物復(fù)合功能菌劑與所述植物吸收促進(jìn)劑、細(xì)胞分裂素6-BA或KT、生長(zhǎng)素2,4-D、半胱氨酸之間的配比為：(1×106CFU-1×107CFU):(0.2-0.5mg):(0.01-0.1mg):(0.03-0.2mg):(0.5-2mg)；將植物吸收促進(jìn)劑、細(xì)胞分裂素6-BA或KT、生長(zhǎng)素2,4-D、半胱氨酸依次加入到所述微生物復(fù)合功能菌劑中，攪拌速度為100-200r/min，攪拌時(shí)間為13-20min，即得到所述降解劑；
所述接種方式為浸種或噴葉，采用浸種方式接種后，對(duì)植物種子進(jìn)行連續(xù)紅光光照處理2-6天，采用噴葉方式接種后，對(duì)植物葉片進(jìn)行間隔紅光光照處理5-7天，每天的光照時(shí)長(zhǎng)為4-10h。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用復(fù)合PAHs降解菌同時(shí)去除植物體內(nèi)USEPA PAHs的方法，其特征在于：所述微生物復(fù)合功能菌劑的制備方法為：將各菌種分別培養(yǎng)，然后調(diào)整各菌種OD600nm混合制成微生物復(fù)合功能菌劑，具體包括以下步驟：
(1)菌懸液的制備：將8株P(guān)AHs降解菌在LB固體平板進(jìn)行活化，用接種環(huán)從活化平板挑取各單菌落分別接種于無(wú)菌LB液體培養(yǎng)基中，置于30℃、150r/min擴(kuò)大培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，培養(yǎng)完成后，8000r/min 4℃離心5min，棄去上清液，加入無(wú)菌MSM使菌體混合均勻，再次離心，該操作重復(fù)兩次，以充分洗去菌體中殘留的LB培養(yǎng)基；最后用無(wú)菌MSM調(diào)整菌懸液濃度OD600nm分別為0.2、0.5、1.0、1.5；
(2)將獲得的菌懸液按等體積比混合，制得不同濃度OD600nm復(fù)合降解菌儲(chǔ)備液，4℃保存?zhèn)溆谩?/p>
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用復(fù)合PAHs降解菌同時(shí)去除植物體內(nèi)USEPA PAHs的方法，其特征在于：所述復(fù)合功能菌濃度OD600nm為0.2、0.5、1.0、1.5。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用復(fù)合PAHs降解菌同時(shí)去除植物體內(nèi)USEPA PAHs的方法，其特征在于：所述復(fù)合功能菌懸液濃度OD600nm為0.5。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用復(fù)合PAHs降解菌同時(shí)去除植物體內(nèi)USEPA PAHs的方法，其特征在于：所述植物吸收促進(jìn)劑是由硫酸錳、天冬氨酸、琥珀酸三種成分按照3:4:1的重量比組成的混合物。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用復(fù)合PAHs降解菌同時(shí)去除植物體內(nèi)USEPA PAHs的方法，其特征在于：所述植物吸收促進(jìn)劑是由硫酸錳、天冬氨酸、琥珀酸按照3:4:1的比例組成的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用復(fù)合PAHs降解菌同時(shí)去除植物體內(nèi)USEPA PAHs的方法，其特征在于：所述浸種方式是指，播種前將植物種子在降解劑中浸泡6h；所述噴葉方式是指，待植物長(zhǎng)至一定大小時(shí)，在成熟前分三次將降解劑噴灑于植物葉片表面。
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