[發(fā)明專(zhuān)利]IL?1β在人重組FGF21蛋白活性檢測(cè)中的應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710443459.2
• 申請(qǐng)日: 2017-06-13
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107345245A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-11-14
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘇興利;趙玉峰;魏蘭蘭;陳鏑;閆愛(ài)麗;梁向艷;趙妍妍;謝榮;劉英光
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 西安醫(yī)學(xué)院
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/68
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/68;C07K14/545
• 代理公司: 西安弘理專(zhuān)利事務(wù)所61214
• 代理人: 許志蛟

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于白細(xì)胞介素應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種IL-1β在人重組FGF21蛋白活性檢測(cè)中的應(yīng)用。

背景技術(shù)

2型糖尿病嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康，其新藥研制一直是科研和開(kāi)發(fā)領(lǐng)域的熱點(diǎn)，尤其以蛋白類(lèi)藥物開(kāi)發(fā)更為引人注目。在眾多的候選蛋白中，成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子21(FGF21)是一個(gè)研發(fā)熱點(diǎn)。研究發(fā)現(xiàn)，人重組FGF21蛋白可降低肥胖和2型糖尿病患者的血脂、減輕體重、降低血糖、顯著減輕2型糖尿病及其并發(fā)癥。在藥物研發(fā)中，建立一個(gè)穩(wěn)定高效的藥物效果檢測(cè)體系是評(píng)價(jià)候選藥物的關(guān)鍵，因此，建立一個(gè)客觀評(píng)價(jià)人重組FGF21蛋白治療糖尿病效果的檢測(cè)體系也是FGF21研發(fā)中的一個(gè)重要環(huán)節(jié)。

目前，普遍采用的FGF21活性檢測(cè)方法是細(xì)胞葡萄糖攝取測(cè)定：該方法通過(guò)葡萄糖的類(lèi)似物2-脫氧葡萄糖來(lái)測(cè)定，2-脫氧葡萄糖攝入細(xì)胞后被己糖激酶磷酸化為6-磷酸-2-脫氧葡萄糖，6-磷酸-2-脫氧葡萄糖無(wú)法進(jìn)入后續(xù)代謝步驟，因而會(huì)在細(xì)胞中聚集，直接成比例地反映細(xì)胞的葡萄糖攝入水平。該方法檢測(cè)過(guò)程中一是使用放射性物質(zhì)標(biāo)記2-脫氧葡萄糖，對(duì)于實(shí)驗(yàn)防護(hù)和環(huán)境保護(hù)要求較高；另外，檢測(cè)方法中使用熒光檢測(cè)方法測(cè)定6-磷酸-2-脫氧葡萄糖的水平，該方法價(jià)格昂貴，不利于高通量篩選使用，同時(shí)該檢測(cè)還受到己糖激酶活性的影響，在酶活性發(fā)生變化時(shí)不能很好地反映葡萄糖攝取能力變化。因此，研發(fā)新的FGF21功能檢測(cè)的體系不僅可彌補(bǔ)葡萄糖攝取測(cè)定的不足，而且有望獲得更為簡(jiǎn)便可靠的檢測(cè)方法，這對(duì)于客觀評(píng)價(jià)人重組FGF21蛋白效果具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的是提供一種IL-1β在人重組FGF21蛋白活性檢測(cè)中的應(yīng)用，為判斷人重組FGF21蛋白活性提供了新的思路，解決了現(xiàn)有檢測(cè)方法成本昂貴、對(duì)環(huán)境要求高的問(wèn)題。

本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是，IL-1β在人重組FGF21蛋白活性檢測(cè)中的應(yīng)用。

本發(fā)明的特征在于，

IL-1β的基因表達(dá)水平與人重組FGF21蛋白的添加濃度的關(guān)系為：IL-1β基因表達(dá)水平由于人重組FGF21蛋白的添加濃度的增加而增大。

IL-1β的基因表達(dá)水平通過(guò)定量PCR方法檢測(cè)。

定量PCR方法檢測(cè)過(guò)程中，IL-1β的引物序列為：

上游引物：5’-AAA TAC CTG TGG CCT TGG GC-3’；

下游引物：5’-CTT GGG ATC CAC ACT CTC CAG-3’。

本發(fā)明的另一個(gè)技術(shù)方案，用于判斷人重組FGF21蛋白活性的IL-1β，IL-1β基因表達(dá)水平被人重組FGF21蛋白濃度上調(diào)，且呈劑量依賴(lài)性升高。

本發(fā)明的特征還在于，

IL-1β為脂肪細(xì)胞內(nèi)的IL-1β。

本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明通過(guò)不同濃度的人重組FGF21蛋白處理脂肪細(xì)胞，采用定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qRT-PCR)檢測(cè)脂肪細(xì)胞內(nèi)的白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)的基因表達(dá)水平，從而確定脂肪細(xì)胞白細(xì)胞介素-1β基因表達(dá)水平成為人重組FGF21蛋白活性檢測(cè)的新指標(biāo)，操作過(guò)程簡(jiǎn)單，對(duì)環(huán)境的要求低，有很好的實(shí)用價(jià)值。

附圖說(shuō)明

圖1是本發(fā)明細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)槌墒熘炯?xì)胞的顯微圖片，A-脂肪細(xì)胞光鏡圖，B-脂肪細(xì)胞的油紅O染色圖；

圖2是本發(fā)明定量PCR方法中白細(xì)胞介素-1β和beta-actin基因的擴(kuò)增曲線圖；

圖3是本發(fā)明定量PCR方法中PCR產(chǎn)物的溶解曲線；

圖4是本發(fā)明人重組FGF21蛋白處理細(xì)胞12h后對(duì)白細(xì)胞介素-1β基因表達(dá)的影響柱狀圖；

圖5是本發(fā)明人重組FGF21蛋白濃度與白細(xì)胞介素-1β基因表達(dá)水平的量效關(guān)系圖。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明脂肪細(xì)胞內(nèi)白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)基因表達(dá)水平在人重組FGF21蛋白活性檢測(cè)的應(yīng)用，下面結(jié)合附圖和具體實(shí)施方式對(duì)本發(fā)明應(yīng)用進(jìn)行詳細(xì)說(shuō)明。

一、細(xì)胞培養(yǎng)和處理