[發(fā)明專利]一種海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法在審
| 申請(qǐng)?zhí)枺?/td> | 201710443322.7 | 申請(qǐng)日： | 2017-06-13 |
| 公開（公告）號(hào)： | CN107182783A | 公開（公告）日： | 2017-09-22 |
| 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人： | 李冬梅;劉小飛 | 申請(qǐng)（專利權(quán)）人： | 廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院環(huán)境園藝研究所 |
| 主分類號(hào)： | A01H4/00 | 分類號(hào)： | A01H4/00 |
| 代理公司： | 廣州市華學(xué)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司44245 | 代理人： | 許菲菲 |
| 地址： | 510640 廣東省*** | 國(guó)省代碼： | 廣東;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 海南 三七 根莖 基部 誘導(dǎo) 再生 植株 方法 | ||
1.一種海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于包括以下步驟：
(a)外植體前處理：采集海南三七的根莖用自來水清洗干凈，剪掉根莖上的貯藏根和須根后，消毒后晾干；再放入洗凈消毒的河沙中，恒溫發(fā)芽，洗凈根莖芽，取其芽基部為外植體材料；
(b)叢生芽誘導(dǎo)：將消毒好的外植體接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)，直至外植體基部形成叢生芽；所述的誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分為MS、6‐芐氨基腺嘌呤1.0～3.0mg/L、萘乙酸0.01～0.10mg/L、椰汁10.0～15.0％、蔗糖20～30g/L、卡拉膠粉9.5～10.0g/L；
(c)增殖繼代：當(dāng)初代芽基部叢生芽長(zhǎng)至4～6cm時(shí)，切下芽，截取芽基部1.0‐1.5cm接種到增殖培養(yǎng)基中誘導(dǎo)叢生芽；所述增殖繼代培養(yǎng)基成分為MS、6‐芐氨基腺嘌呤3.0～8.0mg/L、萘乙酸0.05～0.10mg/L、椰汁10.0～15.0％、蔗糖20～30g/L、卡拉膠粉9.5～10.0g/L；
(d)生根培養(yǎng)：當(dāng)繼代苗高4～7cm時(shí)，切下接種到生根培養(yǎng)基中，所述生根培養(yǎng)基成分為MS、萘乙酸0.10～0.50mg/L、香蕉泥10.0～15.0％、活性炭1.0～1.5g/L、蔗糖20～30g/L、卡拉膠粉9.5～10.0g/L；
(e)煉苗移栽：當(dāng)生根培養(yǎng)基上的苗高5～8cm時(shí)，在溫室自然光照下煉苗7～10d，取出瓶苗，洗凈根部培養(yǎng)基，百菌清溶液消毒后，移栽到進(jìn)口泥炭的基質(zhì)中，保持通風(fēng)透氣，濕度在70～85％，溫度在20～32℃，自然光照條件培養(yǎng)后得移栽苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于，步驟(a)所述的根莖芽的芽高為6‐18cm，有1片葉。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于，步驟(a)所述的消毒后晾干的消毒是將海南三七的根莖放入質(zhì)量濃度0.1‐0.3％的多菌靈粉劑溶液中浸泡消毒30‐40min。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于，步驟(a)所述的恒溫發(fā)芽是在培養(yǎng)箱中33℃恒溫發(fā)芽下進(jìn)行。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于，步驟(a)所述的外植體為切掉海南三七根莖芽上的葉片和莖尖后留下的1～2cm的芽基部。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于：以質(zhì)量百分比濃度計(jì)，步驟b)所述外植體的消毒是先用0.1％‐0.3％高錳酸鉀溶液浸泡根莖芽30～40min，再用0.1％～0.3％的百菌清溶液，浸泡根莖芽30～40min，接著在自來水下反復(fù)沖洗根莖芽30～40min；晾干表面水分后，在超凈工作臺(tái)上，切掉根莖芽上的葉片和莖尖，留2～3cm高的根莖芽基部，用棉球蘸取70％酒精擦拭芽基部，最后用0.1～0.2％升汞溶液消毒15‐18min，滅菌水沖洗4～5次，切掉距離芽基部?jī)深^各約0.3～0.5cm的部分，留1～2cm的芽基部，并將芽基部接種到誘導(dǎo)培養(yǎng)基中。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于：步驟(e)中如果溫度高于32℃，用風(fēng)機(jī)和水簾降溫。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于：所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖繼代培養(yǎng)基和生根培養(yǎng)基的pH都為5.6～5.8；培養(yǎng)基滅菌條件為125℃，30～40min。
9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于：步驟(b)、步驟(c)和步驟(d)所述培養(yǎng)的溫度為25～30℃，光照強(qiáng)度為2000～2300lx，光照時(shí)間控制為14h/d。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的海南三七根莖芽基部誘導(dǎo)再生植株的方法，其特征在于：步驟(e)所述百菌清溶液消毒是用0.1％～0.3％的百菌清溶液浸泡30～40min。
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