[發明專利]藏豬IL-12重組質粒增強PCV2疫苗免疫佐劑的制備方法及應用

有效

• 申請號: 201710441528.6
• 申請日: 2017-06-13
• 公開（公告）號: CN107266581B
• 公開（公告）日: 2021-07-09
• 發明（設計）人: 高榮;肖永樂;方鵬飛;宋婷玉;邱文英;陳祎;李金海;王澤洲;呂學斌;李江凌;龔文波
• 申請（專利權）人: 四川大學;華派生物工程集團有限公司
• 主分類號: C07K19/00
• 分類號: C07K19/00;C12N15/62;A61K39/39;A61K38/20;A61P37/04;A61P31/20;A61P43/00
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢;白艷

本發明公開了藏豬IL?12及其重組質粒在制備PCV2疫苗免疫佐劑中的應用。本發明提供了本發明提供的一種蛋白質，由IL?12蛋白P40亞基、2A、TPA和IL?12蛋白P35亞基組成；所述2A的氨基酸序列為序列2第324?344位；所述TPA的氨基酸序列為序列2第345?369位。本實驗用殼聚糖包裹IL?12質粒制備殼聚糖納米顆粒并與PCV疫苗同時接種實驗動物，分別采用小鼠和豬作為實驗動物，結果表明IL?12真核轉染質粒能有效增強PCV疫苗的免疫應答，為開發新型高效的PCV免疫佐劑提供了思路。

技術領域

本發明屬于生物技術領域，具體屬于分子免疫學，涉及藏豬IL-12及其重組質粒在制備PCV2疫苗免疫佐劑中的應用。

背景技術

豬肉產品是城鄉居民肉類消費的主要來源，與人們生活息息相關。21世紀以來，我國生豬的年存欄數和出欄數一直保持占世界總量的50％左右，居世界首位。我國養豬業取得舉世矚目成就的同時，還存在著許多制約我國養豬業健康發展的因素，其中疾病是最為主要的因素。目前，我國豬病診斷和防治水平與世界發達國家相比還存在著較大的差距，豬傳染性疾病仍然十分嚴重，圓環病毒2型(Porcine circovirus type 2，PCV2)感染是較為常見的一類傳染病。PCV2是引起斷奶仔豬多系統衰竭綜合征(Postweaning multisystemicwasting syndrome，PMWS)的主要病原，臨床上常與豬高致病性繁殖與呼吸綜合征、豬口蹄疫以及豬細小病毒病等混合感染、繼發感染，給全世界養豬業造成了重大的經濟損失。PCV2不僅是引起PMWS的病原體，而且還與豬皮炎與腎病綜合征、肉芽腫性腸炎、豬呼吸道疾病綜合征、母豬繁殖障礙、壞死性淋巴結炎及仔豬先天性震顫等疾病密切相關，這些與PCV2相關的疾病統稱為豬圓環病毒病(Porcine circovirus disease，PCVD)。

目前，防控PCVD的主要手段是接種疫苗，國內外學者在PCV2疫苗研究方便取得了顯著成就，成功研制了包括PCV2滅活疫苗、PCV2弱毒疫苗、PCV2基因工程疫苗、PCV1-2嵌合疫苗以及PCV2標記疫苗等。但疫苗的使用存在一定的局限性，在我國PCV2全病毒滅活疫苗使用較為廣泛，而其他疫苗使用較少。而PCV2滅活苗疫苗免疫豬群后，會出現豬采食量明顯減少，偶有個別豬死亡等情況，為此，選擇毒性小，免疫效果好的免疫佐劑是解決這一問題的不二途徑。常用免疫佐劑有脂質體，殼聚糖等，但對細胞因子佐劑的研究較少。

細胞因子是一類由生物體自身的造血系統、免疫系統產生的活性多功能蛋白。目前發現的細胞因子有十幾種，其中白細胞介素(IL)、腫瘤壞死因子(TNF-α)和干擾素(IFN-γ)這幾種對動物極為重要。IL-12是IL-12細胞因子家族中的重要一員，是由p40和p35兩個亞基組成的異致二聚體，能增強NK細胞的活性，誘導Th1細胞的分化，在許多炎癥反應和免疫調解中都起著重要的作用。細胞因子由于其天然存在于生物體內，對免疫具有調節作用，近年來越來越受到關注，然而細胞因子在體內的半衰期短，時效短而成本高，因此，將細胞因子基因克隆進入質粒并轉染至生物體內表達為解決這一問題提供了思路。

發明內容

本發明一個目的是提供藏豬IL-12。

本發明提供的一種蛋白質(命名為IL-12’)，由IL-12蛋白P40亞基、2A(自剪切連接肽)、TPA(信號肽，作用分泌信號)和IL-12蛋白P35亞基組成；

所述2A的氨基酸序列為序列2第324-344位；

所述TPA的氨基酸序列為序列2第345-369位。

上述蛋白質中，所述IL-12蛋白來源于藏豬；

或，所述蛋白質為如下(1)或(2)：

(1)由序列表中序列2所示的氨基酸序列組成的蛋白質；

(2)將序列表中序列2所示的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有相同功能的由(1)衍生的蛋白質。