[發明專利]一種固相合成戈那瑞林的方法

在審

• 申請號: 201710439767.8
• 申請日: 2017-06-12
• 公開（公告）號: CN107176975A
• 公開（公告）日: 2017-09-19
• 發明（設計）人: 曹云峰;王平;孫曉宇;洪沫;高鵬
• 申請（專利權）人: 丹東中科潤華生物科技有限公司
• 主分類號: C07K7/23
• 分類號: C07K7/23;C07K1/16;C07K1/14;C07K1/06;C07K1/04
• 代理公司: 大連星海專利事務所有限公司21208
• 代理人: 楊翠翠

技術領域

本發明屬于醫藥領域，具體涉及一種合成戈那瑞林的方法。

背景技術

戈那瑞林，其化學名稱為5’-氧代脯氨酰-L-組氨酰-L-色氨酰-L-絲氨酰-L-酪氨酰-甘氨酰-L-亮氨酰-L-精氨酰-L-脯氨酰-甘氨酰胺，分子式為C₅₅H₇₅N₁₇O₁₃；分子量為1182.33。

戈那瑞林為人工合成的促性腺激素釋放素（GnRH），屬肽類化合物，和哺乳動物下丘腦分泌的促性腺激素釋放激素天然提取物的結果完全相同。戈那瑞林肌注之后可發揮與純天然激素類似的效果，促性腺激素釋放素由丘腦下部以脈沖方式分泌進入垂體門脈系統到垂體前葉，與垂體促性腺激素細胞上的高親和力受體特異結合，促進動物垂體前葉促卵泡素（FSH）和促黃體素（LH）的合成和分泌。通過提高普通的下丘腦-垂體功能，改善動物總體受精率，從而恢復卵泡的正常生長和成熟，主要用于動物卵泡囊腫的治療。2010年，農業部批準戈那瑞林原料藥及其制劑為國家第三類新獸藥

目前有關戈那瑞林合成的報道較少。中國專利CN105646671A公開了SPE柱和反相色譜柱相結合進行梯度洗脫純化，得到較高純度的戈那瑞林的純化方法。本發明的目的在于提供一條適于規模化生產的戈那瑞林合成方法，解決該產品生產過程中粗肽純度低，產品不易控制、收率不高等問題。

發明內容

本發明的目的是提供一種從全固相法合成戈那瑞林的方法，具體為采用高效的裂解后能夠保留氨基的Rink Amide AM樹脂作為固相載體，在縮合試劑和堿試劑的作用下，從C端到N端逐一延伸偶聯上帶有Fmoc保護基的氨基酸，得到全保護肽樹脂，再通過一步法進行裂解與脫保護得到戈那瑞林粗品，經過分離制備得到戈那瑞林精品。具體步驟如下：

步驟1、保護的Gly在縮合試劑和堿試劑作用下與高效的Rink Amide Am Resin樹脂進行偶聯反應，得到肽樹脂1；

步驟2、按照戈那瑞林氨基酸序列C端到N端的順序，從肽樹脂1出發，在縮合試劑和堿試劑作用下，將保護的Pro、保護的Arg (Pbf)、保護的Leu、保護的Gly、保護的Tyr (tBu)、保護的Ser (tBu)、保護的Trp (Boc) 、保護的His (Trt)和pGlu進行逐一延伸偶聯，得到保護的戈那瑞林樹脂；

步驟3、保護的戈那瑞林肽樹脂經酸解劑一步法進行裂解與脫保護得到戈那瑞林粗品；

步驟4、戈那瑞林粗品經純化轉鹽后得戈那瑞林精品；

上述方法中，所述保護的Pro、保護的Arg (Pbf)、保護的Leu、保護的Gly、保護的Tyr (tBu)、保護的Ser (tBu)、保護的Trp (Boc) 、保護的His (Trt)和pGlu如下：Fomc-Gly； Fmoc-Pro；Fmoc- Arg (Pbf)；Fmoc-Leu；Fmoc-Gly；Fmoc- Tyr (tBu)；Fmoc-Ser (tBu)；Fmoc- Trp (Boc)；Fmoc- His (Trt) ；pGlu-OH。如：Fmoc- Trp (Boc)的結構為：，Fmoc保護了氨基酸中的氨基，括號中的Boc保護了氨基酸中除羧基外的其他的活性氫；Fmoc- Arg (Pbf)、 Fmoc- Tyr (tBu)、Fmoc-Ser (tBu)、Fmoc- Trp (Boc)、Fmoc- His (Trt)均是如此。

上述方法中，所述縮合試劑為N,N-二異丙基碳二亞胺（DIC）、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷/有機堿(PyBOP)、苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽/有機堿(HBTU)、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸酯/有機堿(TBTU)中的一種或幾種，優選苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸鹽。

上述方法中，所述有機堿為N,N-二異丙基乙胺(DIPEA)、三乙胺(TEA)、2,4,6-三甲基吡啶或N-甲基嗎啡啉(NMM)中的一種或幾種，優選N,N-二異丙基乙胺。

上述方法中，所述的反應體系選擇易溶解原料的非質子性溶劑，包括氯仿、二氯甲烷、四氫呋喃、乙酸乙酯、N,N-二甲基甲酰胺中的任意一種，優選N,N-二甲基甲酰胺或二氯甲烷。

上述方法中，所述縮合試劑的摩爾用量優選為多肽樹脂中氨基總摩爾數的1～6倍，更優選為1.5～2.5倍。

上述方法中，所述堿試劑的摩爾用量優選為多肽樹脂中氨基總摩爾數的1～6倍，更優選為1.5～2.5倍。