[發明專利]一種基于微流控芯片的用于多重核酸擴增產物熒光檢測的方法

有效

• 申請號: 201710438293.5
• 申請日: 2017-06-12
• 公開（公告）號: CN107058063B
• 公開（公告）日: 2019-08-20
• 發明（設計）人: 閆赫;邢婉麗;程京
• 申請（專利權）人: 博奧生物集團有限公司;清華大學
• 主分類號: C12M1/00
• 分類號: C12M1/00;C12M1/34;C12Q1/6816
• 代理公司: 北京紀凱知識產權代理有限公司 11245
• 代理人: 關暢

1.一種用于多重核酸擴增產物熒光檢測的離心式微流控芯片，所述微流控芯片為圓形；其包括多個操作單元，每個所述操作單元均包括加樣孔、擴增腔室、虹吸管道、緩沖管道、預分配室、檢測腔室、廢液腔和自通氣管道；所述預分配室和所述檢測腔室的體積相同；所述擴增腔室采用圓形結構；

所述擴增腔室與所述加樣孔連接，所述擴增腔室遠離旋轉中心一端依次經所述虹吸管道和所述緩沖管道與所述預分配室連接；

所述預分配室設置多個，多個所述預分配室通過緩沖管道連通，且多個所述預分配室與緩沖管道的連接處距離旋轉中心的長度根據進樣的先后順序依次增大；將距離旋轉中心的長度最大的所述預分配室設置為廢液腔；除所述廢液腔以外的每個所述預分配室下方均設置有檢測腔室；

所述廢液腔還與所述自通氣管道一端連接，所述自通氣管道另一端與所述擴增腔室靠近旋轉中心一側連接；

全封閉的所述微流控芯片中的氣體通過所述自通氣管道進行自循環；

所述微流控芯片還包括第一界面閥、第二界面閥和第三界面閥；所述虹吸管道上設置有所述第一界面閥，所述第一界面閥與旋轉中心之間的距離大于所述擴增腔室與旋轉中心的最小距離；每個所述預分配室下方均通過所述第二界面閥與所述檢測腔室連接；位于所述擴增腔室上方的自通氣管道上設置有所述第三界面閥。

2.根據權利要求1所述的離心式微流控芯片，其特征在于：所述虹吸管道親水化修飾；

或，所述第一界面閥和所述第三界面閥表面疏水化修飾。

3.根據權利要求1或2所述的離心式微流控芯片，其特征在于：所述預分配室與緩沖管道的連接處距離旋轉中心的最大長度與最小長度之差為3mm-9mm。

4.根據權利要求1或2所述的離心式微流控芯片，其特征在于：

所述微流控芯片是由高分子聚合物、玻璃、硅和金屬材料中的一種或多種制成；

所述高分子聚合物為聚甲基丙烯酸甲酯或聚丙烯或聚碳酸酯。

5.根據權利要求1或2所述的離心式微流控芯片，其特征在于：

所述操作單位的個數為2個；

每個所述操作單元的所述檢測腔室和預分配室的個數均為7個；

所述預分配室與所述緩沖管道的連接處距離旋轉中心的最大長度與最小長度之差為3mm。

6.一種檢測多重核酸擴增產物的方法，包括如下步驟：將多重核酸擴增產物分成若干份，每份與相應的熒光探針雜交，根據熒光強度對所述多重核酸擴增產物進行定性或定量判定；其中每份對應的熒光探針序列不同但熒光基團相同。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于：所述方法包括如下步驟：

（1）將多重核酸擴增體系通過權利要求1-5任一所述的微流控芯片上的加樣孔加入到所述微流控芯片的擴增腔室內，得到待反應的芯片，將所述待反應的芯片進行多重擴增反應，得到反應后芯片；所述反應后芯片的擴增腔室中含有多重核酸擴增產物；

（2）將所述反應后芯片進行第一次離心，通過離心作用，使所述多重核酸擴增產物突破所述微流控芯片的第一界面閥；然后進行第二次離心，通過毛細作用，使所述多重核酸擴增產物填滿所述微流控芯片的虹吸管道；然后進行第三次離心，通過虹吸作用，使所述多重核酸擴增產物依次填滿所述微流控芯片的預分配室；然后進行第四次離心，通過離心作用使所述預分配室內的多重核酸擴增產物突破所述微流控芯片的第二界面閥，進入到所述微流控芯片的檢測腔室內，分別與每個所述檢測腔室中預點樣的熒光探針雜交，得到雜交后芯片；

所述第一次離心的轉速和所述第三次離心的轉速高于第二次離心的轉速，所述第四次離心的轉速高于所述第三次離心的轉速；

每個所述檢測腔室中預點樣的熒光探針中的熒光基團相同；

（3）使用單熒光通道檢測所述雜交后芯片中的每個檢測腔室中的多重核酸擴增產物的熒光強度，實現對所述多重核酸擴增產物的熒光檢測。