[發明專利]X?連鎖淋巴增殖綜合征診斷試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201710437610.1
• 申請日: 2017-06-12
• 公開（公告）號: CN107091924A
• 公開（公告）日: 2017-08-25
• 發明（設計）人: 王昭;高卓;張嘉;王旖旎;王晶石;吳林;賴雯苑;金志麗;孟碩;宋悅;崔婷婷
• 申請（專利權）人: 首都醫科大學附屬北京友誼醫院
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 李丙林

1.一種X-連鎖淋巴增殖綜合征診斷試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括：

抗人CD3、CD56的流式熒光抗體、抗人XIAP抗體及其同型對照抗體、以及所述抗人XIAP抗體對應的Western Blot二抗和流式熒光二抗。

2.根據權利要求1所述的試劑盒，其特征在于，所述抗人CD3、CD56、流式熒光二抗所帶有的熒光標記依次為FITC、APC、PE。

3.根據權利要求1或2所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中還包括抗凝劑、細胞固定劑、細胞破膜劑、緩沖液、蛋白裂解液中的一種或多種。

4.根據權利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述流式緩沖液的配方為：含有1.8％～2.2％FBS和1.8mM～2.2mM EDTA的1×PBS溶液。

5.權利要求1～4任一項所述的試劑盒在制備診斷X-連鎖淋巴組織增殖綜合征的產品中的應用。

6.一種使用權利要求1～4任一項所述的試劑盒檢測T和NK細胞中XIAP蛋白豐度的方法，其特征在于，包括：

1).分離待檢樣本中的外周血單個核細胞及并計數調整細胞濃度；

2).向步驟1)中的細胞中同時加入抗人CD3、CD56的流式熒光抗體并孵育；

3).離心，將沉淀與細胞固定劑共孵育；

4).離心，將沉淀與細胞破膜劑共孵育；

5).離心，用流式緩沖液洗滌沉淀后重懸；

6).將重懸后的樣品分為兩組，分別加入抗人XIAP抗體和其同型對照抗體并孵育；

7).離心，用流式緩沖液洗滌沉淀后重懸；

8).每管加抗人XIAP抗體對應的流式熒光二抗并孵育；

9).離心，用流式緩沖液洗滌沉淀后重懸，并用流式細胞儀進行檢測；

和/或；

a).分離待檢樣本中的外周血單個核細胞并用蛋白裂解液裂解收集蛋白；

b).將蛋白使用所述抗人XIAP抗體以及所述抗人XIAP抗體對應的二抗進行Western Blot實驗，讀取所得條帶的灰度值或熒光值；

其中步驟1)～9)與步驟a)～b)沒先后順序。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟1)中，所述細胞濃度為3.5～4.5×10⁶/ml。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，孵育條件為：

室溫避光孵育15～25min。

9.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟2)中，CD3、CD56的抗體的濃度分別為8～12μl/100μl、4～6μl/100μl；

優選的，在步驟6)中，抗人XIAP抗體和其同型對照抗體的抗體濃度均為0.5～0.7μl/100μl；

優選的，在步驟8)中，抗人XIAP抗體對應的流式熒光二抗的抗體濃度為1.8～2.2μl/100μl。

10.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，在步驟b)中，抗人XIAP抗體按0.5～1.5：1000添加，室溫下搖動孵育1～3h后2～6℃孵育8～16h。