[發明專利]基于Hemin@Fe3O4MPs模擬酶的化學發光免疫檢測雞細胞因子的方法

有效

• 申請號: 201710433510.1
• 申請日: 2017-06-09
• 公開（公告）號: CN107328928B
• 公開（公告）日: 2019-08-09
• 發明（設計）人: 楊占軍;黃英;李娟
• 申請（專利權）人: 揚州大學
• 主分類號: G01N33/535
• 分類號: G01N33/535;G01N33/532;G01N33/543
• 代理公司: 南京理工大學專利中心 32203
• 代理人: 劉海霞

本發明公開了一種基于Hemin@Fe₃O₄MPs模擬酶的化學發光免疫檢測雞細胞因子的方法。所述方法采用雙酶協同催化信號放大技術，免疫傳感陣列用硅烷化的可拋式玻片制得，將不同雞細胞因子的捕獲抗體用共價結合的方式包被于相應結合位點，并將不同的雞細胞因子的標記抗體固定在Hemin@Fe₃O₄MPs納米粒子上制備形成相應的Hemin@Fe₃O₄MPs?Ab₂信號放大納米探針。本發明通過二級抗體對抗原的特異性識別形成穩定的夾心的雞細胞因子免疫復合物，催化化學發光反應，產生強烈的化學發光。本發明方法的檢測范圍為0.005～0.1ng/mL，能夠實現雙酶協同催化信號放大的多組分雞細胞因子的化學發光免疫檢測。

技術領域

本發明屬于禽類細胞因子檢測領域，具體涉及了一種基于Hemin@Fe₃O₄MPs模擬酶的化學發光免疫檢測雞細胞因子的方法。

背景技術

細胞因子通過自分泌、旁分泌或內分泌等方式在細胞間信息傳遞、機體免疫、刺激造血干細胞再生、參與組織修復等機體反應中發揮著重要作用。當前，細胞因子的檢測方法較少，傳統的檢測方法多為生物學和免疫學上的方法，主要包括生物活性測定法，免疫測定法、分子生物學法等。

Zhao等通過對兔子體內白細胞介素-6進行酶聯免疫吸附試驗、對正常和梗死組的IFN-γ的表達進行免疫組織化學法測定，研究炎癥對兔急性心肌缺血再灌注現象的影響，并對單劑量阿托伐他汀對炎癥和心急無復流的影響作出評價(Zhao X J,et al.Effectsof single-dose atorvastatin on interleukin-6,interferon gamma,and myocardialno-reflow in a rabbit model of acute myocardial infarction and reperfusion[J].Brazilian Journal of Medical and Biological Research,2014,47(3):245-251.)。Bhavsar等通過使用電鍍印刷電路板的電極，采用無標記電化學阻抗譜法檢測了血清中的細胞因子(IL-12)含量，通過印刷電路板和電路技術結合，利用金對蛋白類物質的強吸附能力固定抗體，制得傳感器。此傳感器從樣品分析到檢測可在90s內完成，實現了細胞因子的快速、無標記檢測(Bhavsar K,et al.A cytokine immunosensor for MultipleSclerosis detection based upon label-free electrochemical impedancespectroscopy using electroplated printed circuit board electrodes[J].Biosensors and Bioelectronics,2009,25(2):506-509.)。

以上方法均存在檢測組分單一的缺陷。免疫分析的實際運用中，需要測定復雜體系中多種組分的含量，如腫瘤細胞的檢測、不同細胞因子的檢測以及臨床疾病的診斷等。目前，多種免疫分析方法已經被發展用來檢測單一禽類細胞因子，但尚無多種禽類細胞因子聯合檢測的多組分免疫分析方法的報道。基于對多種組分含量的測定需求，多組分免疫分析成像技術在免疫分析領域中受到了人們廣泛地關注與研究。

發明內容

本發明的目的是提供一種能夠實現多種雞細胞因子同時檢測的、基于 Hemin@Fe3O4MPs模擬酶的化學發光免疫檢測雞細胞因子的方法。

為實現上述目的，本發明的技術方案如下：