[發明專利]用于高通量聚糖分析的裝置、方法、計算機程序產品和試劑盒

在審

• 申請號: 201710431702.9
• 申請日: 2012-08-10
• 公開（公告）號: CN107422020A
• 公開（公告）日: 2017-12-01
• 發明（設計）人: P.斯萊德
• 申請（專利權）人: 生命科技公司
• 主分類號: G01N27/447
• 分類號: G01N27/447;G01N33/68;G01N33/58;G01N33/577
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 楊思捷

1.用于高通量聚糖分析的方法，包括：

將多個糖蛋白樣品加入多個上樣孔中；

使用變性溶液變性上樣孔中的糖蛋白樣品；

使用聚糖裂解酶從上樣孔中的每個變性糖蛋白樣品上裂解聚糖；

用帶電的熒光標簽標記所裂解的聚糖；

施用配置為使標記聚糖從上樣孔穿過離子滲透膜進入并沿著與上樣孔對應排列的多個毛細管中的一個遷移的電場，每個毛細管包括包含成層膠的第一部分和包含分離膠的第二部分；

用適合導致標記聚糖發射熒光輻射的光源激發沿著毛細管遷移的標記聚糖；

檢測由標記聚糖所發射的熒光輻射；和

基于所檢測的熒光輻射分析標記聚糖。

2.權利要求1的方法，其中變性上樣孔中的糖蛋白樣品包括使用SDS變性糖蛋白樣品。

3.權利要求1的方法，還包括將每個糖蛋白樣品與TBE緩沖溶液混合。

4.權利要求1的方法，其中從每個變性糖蛋白樣品裂解聚糖包括使用PNGase F裂解聚糖。

5.權利要求1的方法，其中從每個變性糖蛋白樣品裂解聚糖包括使用內切糖苷酶H裂解聚糖。

6.權利要求1的方法，其中從每個變性糖蛋白樣品裂解聚糖包括使用Endo D、Endo Fl、Endo F2和Endo F3中的一種或多種裂解聚糖。

7.權利要求1的方法，其中從每個變性糖蛋白樣品裂解聚糖包括使用ABS (產脲節桿菌唾液酸酶)、NAN 1 (重組唾液酸酶)、AMF (杏仁粉α-巖藻糖苷酶)、BKF (牛腎α-巖藻糖苷酶)、BTG (牛睪丸β-半乳糖苷酶)、SPG (肺炎鏈球菌β-半乳糖苷酶)、GUH (肺炎鏈球菌己糖胺酶，大腸桿菌重組體)和JBM (刀豆甘露糖苷酶)中的一種或多種裂解聚糖。

8.權利要求1的方法，其中從每個變性糖蛋白樣品裂解聚糖包括使用肽-N-(N-乙酰基-β-葡萄糖胺基)天冬酰胺酰胺酶裂解聚糖。

9.權利要求1的方法，其中使用肽-N-(N-乙酰基-β-葡萄糖胺基)天冬酰胺酰胺酶裂解聚糖包括裂解N-連接聚糖。

10.權利要求1的方法，其中用帶電熒光標簽標記所裂解的聚糖包括用8-氨基萘-1,3,6-三磺酸二鈉在聚糖的還原末端標記所裂解的聚糖。

11.權利要求1的方法，其中用帶電熒光標簽標記所裂解的聚糖包括用7-氨基-1,3-萘二磺酸鉀在聚糖的還原末端標記所裂解的聚糖。

12.權利要求1的方法，其中用帶電熒光標簽標記所裂解的聚糖包括用4-氨基-萘磺酸鈉在聚糖的還原末端標記所裂解的聚糖。

13.權利要求1的方法，其中用帶電熒光標簽標記所裂解的聚糖包括用包含酰肼官能團的帶電熒光標簽在聚糖的還原末端標記所裂解的聚糖。

14.權利要求1的方法，其中用帶電熒光標簽標記所裂解的聚糖包括用包含ALEXA FLUOR 350酰肼、ALEXA FLUOR 488酰肼、ALEXA FLUOR 647酰肼、ALEXA FLUOR 594酰肼和ALEXA FLUOR 555酰肼中的一種或多種的帶電熒光標簽在聚糖的還原末端標記所裂解的聚糖。

15.權利要求1的方法，其中用帶電熒光標簽標記所裂解的聚糖包括用包含ALEXA FLUOR 350羥胺、ALEXA FLUOR 488羥胺和ALEXA FLUOR 647羥胺中的一種或多種所包括的羥胺官能團的帶電熒光標簽在聚糖的還原末端標記所裂解的聚糖。

16.權利要求1的方法，其中用帶電熒光標簽標記所裂解的聚糖包括用包含8-酰肼-芘-3,6,8-三磺酸鹽中所包括的酰肼官能團的帶電熒光標簽在聚糖的還原末端標記所裂解的聚糖。

17.權利要求1的方法，其中用帶電熒光標簽標記所裂解的聚糖包括用包含8-羥胺-芘-3,6,8-三磺酸鹽中所包括的羥胺官能團的帶電熒光標簽在聚糖的還原末端標記所裂解的聚糖。

18.權利要求1的方法，其中用帶電熒光標簽標記所裂解的聚糖包括使用APTS、ANTS、ANDA和ANSA中的一種或多種在聚糖的還原末端標記所裂解的聚糖。