[發明專利]一種PQQ-DA印跡磁性納米粒子的制備方法及其應用

有效

• 申請號: 201710431620.4
• 申請日: 2017-06-09
• 公開（公告）號: CN107224969B
• 公開（公告）日: 2019-09-27
• 發明（設計）人: 周杏琴;欽曉峰;毛師師;徐希杰;謝敏浩
• 申請（專利權）人: 江蘇省原子醫學研究所
• 主分類號: B01J20/286
• 分類號: B01J20/286;B01J20/30;B01D15/38;G01N30/02
• 代理公司: 無錫市大為專利商標事務所(普通合伙) 32104
• 代理人: 時旭丹;張仕婷

一種PQQ?DA印跡磁性納米粒子的制備方法及其應用，屬于生物分析技術領域。本發明以磁性Fe₃O₄為內核，磁性Fe₃O₄包裹SiO₂，再制備獲得PQQ?DA印跡磁性納米粒子，形成了PQQ?DA表面具有高識別性、高選擇性的磁性納米粒子印跡材料。這種特異性的磁性納米粒子進行分子印跡修飾后，對目標物同時具有磁性及特異選擇性，對復雜基質的腦組織中低濃度化合物的分離、凈化和富集具有很大的優勢。制備的PQQ?DA印跡磁性納米粒子用于UPLC?MS測定生物體內PQQ?DA痕量分析。本發明建立了基于分子印跡固相萃取的UPLC?MS，能檢測到小鼠腦內痕量PQQ?DA的含量，檢測限達到0.2×10^?11 mg/mL。對神經系統疾病的發生和機理研究具有重要指導意義。

技術領域

本發明公開一種PQQ-DA印跡磁性納米粒子的制備方法及其應用，屬于生物分析技術領域。

背景技術

多巴胺（DA）為腦內一種重要的神經傳遞質，是一種信號轉導分子，參與許多生命過程，在控制認知功能和行為功能中具有重要作用。腦內DA含量的改變與多種疾病的發生有關，如孤獨癥、帕金森病及精神分裂癥等。

吡咯并喹呤醌（PQQ）是一種氧化還原酶輔基，主要分布于原核生物以及部分植物和哺乳動物之中。PQQ在神經系統方面具有極其重要的功能，在腦中能夠促進神經因子的產生對神經細胞具有神經保護作用，采用PQQ缺損建立的大鼠模型顯示免疫功能及認知功能下降，已有報道PQQ對帕金森氏病具有防治作用。PQQ在神經系統方面的重要功能與其特殊的化學結構有關，能夠與多種活性基團發生反應。

PQQ是否對多巴胺具有調節作用，至今無相關報道。我們發現PQQ與DA反應生成化合物PQQ-DA，其對神經系統是否具有保護作用，至今無相關研究。研究腦內PQQ-DA的含量對PQQ與多巴胺神經遞質的作用機制具有重要意義。腦內PQQ-DA含量屬于痕量級，一般的分析方法難以檢測。常規固相萃取吸附劑特異選擇性不足，容易將其他干擾物與目標物共同萃取下來。

PQQ-DA分子具有特殊結構，多羥基和酰胺基帶電粒子。因此本發明以磁性Fe₃0₄為內核，四甲氧基硅烷、3-（異丁烯酰氧）丙基三甲氧基硅烷對磁性納米粒子表面進行包裹和修飾，將可聚合雙鍵引入硅膠微粒表面，在引發劑作用下，使甲基丙烯酸在硅膠表面實現接枝聚合，形成接枝微粒，增強了硅膠表面的活性，形成可以進一步被多種有機官能團修飾的分子印跡聚合層。洗去模板分子后，在硅膠表面的聚合物薄層中留下了大量可匹配的空穴。而且由于PQQ-DA上的酰氨基與接枝微粒表面的功能大分子之間存在著靜電相互作用與吸附作用，因而可以優先吸附與洗脫。形成了PQQ-DA表面具有高識別性、高選擇性的磁性分子納米印跡材料。這種特異性的磁性納米粒子進行分子印跡修飾后，對目標物同時具有磁性及特異選擇性。對復雜基質的腦組織中低濃度化合物的分離、凈化和富集具有很大的優勢。

發明內容

本發明目的是提供一種PQQ-DA印跡磁性納米粒子的制備方法及其用于UPLC-MS測定生物體內PQQ-DA痕量分析。

建立了基于分子印跡固相萃取的UPLC-MS，能檢測到小鼠腦內痕量PQQ-DA的含量，檢測限達到 0.2×10 ^-11 mg/mL。對神經系統疾病的發生和機理研究具有重要指導意義。

本發明的技術方案：

PQQ-DA分子結構為：

一種PQQ-DA印跡磁性納米粒子的制備方法，步驟為：

（1）Fe₃O₄磁性納米粒子的制備：