[發(fā)明專利]基于微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析的sST2檢測試劑盒

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710431240.0
• 申請日: 2017-06-09
• 公開（公告）號(hào): CN107340386A
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張忠英;葉春蕾
• 申請（專利權(quán)）人: 廈門大學(xué)附屬中山醫(yī)院
• 主分類號(hào): G01N33/531
• 分類號(hào): G01N33/531;G01N33/543;G01N33/577;G01N33/96
• 代理公司: 廈門南強(qiáng)之路專利事務(wù)所(普通合伙)35200
• 代理人: 馬應(yīng)森

1.基于微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析的sST2檢測試劑盒，其特征在于設(shè)有反應(yīng)緩沖液、包被有sST2單克隆抗體的磁性微粒子、標(biāo)記有吖啶酯的sST2單克隆抗體、發(fā)光液、sST2抗原標(biāo)準(zhǔn)品溶液、濃縮洗滌液。

2.如權(quán)利要求1所述基于微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析的sST2檢測試劑盒，其特征在于所述發(fā)光液包括發(fā)光液A和發(fā)光液B，所述發(fā)光液A為過氧化氫和硝酸水溶液；所述發(fā)光液A中過氧化氫的質(zhì)量百分濃度為0.5％～3％，硝酸的摩爾濃度為0.01～0.5M。

3.如權(quán)利要求1所述基于微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析的sST2檢測試劑盒，其特征在于所述發(fā)光液B為氫氧化鈉與Triton X-100水溶液；所述發(fā)光液B中的氫氧化鈉的摩爾濃度為0.05～1M，Triton X-100的體積百分濃度為0.1％～2％。

4.如權(quán)利要求1～3所述基于微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析的sST2檢測試劑盒的制備方法，其特征在于包括以下步驟：

1)制備反應(yīng)緩沖液；

2)制備包被有sST2抗體的磁微粒；

3)制備吖啶酯標(biāo)記的sST2抗體；

4)制備sST2抗原標(biāo)準(zhǔn)品溶液；

5)制備發(fā)光液；

6)制備洗滌液。

5.如權(quán)利要求4所述基于微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析的sST2檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟1)中，所述制備反應(yīng)緩沖液的具體方法為：pH為7.4的磷酸鹽緩沖液，內(nèi)含0.5％牛血清白蛋白、0.5％酪蛋白、0.05％Tween-20和防腐劑。

6.如權(quán)利要求4所述基于微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析的sST2檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟2)中，所述制備包被有sST2抗體的磁微粒的具體方法為：

(1)將磁微粒、EDC與NHS的質(zhì)量比為1︰1︰1，并加入pH為5.0的50mM MES溶液，使磁微粒濃度為4mg/mL，放置在垂直旋轉(zhuǎn)儀上活化，活化環(huán)境溫度25℃，時(shí)間20min；

(2)將活化后的磁微粒與sST2單克隆抗體比例為每毫克磁微粒標(biāo)記30μg的抗體，放置在垂直旋轉(zhuǎn)儀上標(biāo)記，反應(yīng)環(huán)境溫度25℃，時(shí)間3h；

(3)將反應(yīng)后的磁微粒用洗液洗滌，加入含有甘氨酸、0.5％牛血清白蛋白、0.05％Tween-20、pH為7.4的磷酸鹽緩沖液，使磁微粒濃度為4mg/mL，放置在垂直旋轉(zhuǎn)儀上終止，反應(yīng)環(huán)境溫度25℃，時(shí)間2h；

(4)將終止后的磁微粒用洗液洗滌，加入0.5％牛血清白蛋白、0.5％酪蛋白、0.05％Tween-20、防腐劑、pH為7.4的磷酸鹽緩沖液，使磁微粒濃度為4mg/mL，2～8℃保存?zhèn)溆谩?/p>

7.如權(quán)利要求4所述基于微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析的sST2檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟3)中，所述制備吖啶酯標(biāo)記的sST2抗體的具體方法為：

(1)取待標(biāo)記sST2單克隆抗體50μg，加入含Nacl的磷酸鹽緩沖液至體積為300μL，再加入5μL吖啶酯母液，振蕩混勻，避光反應(yīng)30min；

(2)反應(yīng)后加入200μL含Nacl和甘氨酸的磷酸鹽緩沖液，手工顛倒20次混勻，避光反應(yīng)30min；反應(yīng)后將產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至透析袋中，透析液為pH為7.4的20mM PBS緩沖液，2～8℃避光透析，每隔2h換一次PBS緩沖液，共更換3次，以除去未標(biāo)記的吖啶酯；

(3)將標(biāo)記物取出，加入10μL 10％牛血清白蛋白溶液，再按照實(shí)際體積加入等體積甘油，手工顛倒混勻后，-20℃以下避光保存?zhèn)溆谩?/p>

8.如權(quán)利要求4所述基于微粒子化學(xué)發(fā)光免疫分析的sST2檢測試劑盒的制備方法，其特征在于在步驟4)中，所述制備sST2抗原標(biāo)準(zhǔn)品溶液的具體方法為：采用sST2抗原，用含有0.5％牛血清白蛋白、0.5％酪蛋白、0.05％Tween-20、pH為7.4的磷酸鹽緩沖液梯度稀釋為800ng/mL、400ng/mL、200ng/mL、100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、1.5625ng/mL的系列標(biāo)準(zhǔn)品溶液。