[發(fā)明專利]用甘薯葉柄進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)和分化的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710430208.0
• 申請日: 2017-06-01
• 公開（公告）號: CN107173225B
• 公開（公告）日: 2019-01-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 李志亮;邢浩春;葉嘉;苗俊玲;劉曉斌
• 申請（專利權(quán)）人: 邯鄲學(xué)院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發(fā)明公開了一種用甘薯葉柄進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)和分化的方法，在超凈工作臺中，用經(jīng)過滅菌的解剖刀將葉柄剪成長度為1?2cm的切段，接種到無菌培養(yǎng)基上，25℃下進(jìn)行暗培養(yǎng)，該無菌培養(yǎng)基的配方為：MS+6?BA 0.5mg/L+NAA0.5mg/L；在無菌條件下，將培養(yǎng)20天得到的愈傷轉(zhuǎn)接到分化培養(yǎng)基上，光照強(qiáng)度1600lx，每天光照16小時，暗照8小時，該分化培養(yǎng)基的配方為：MS+2，4?D 0.01mg/L+KT 1.0mg/L，得甘薯組培苗。本發(fā)明以葉柄為外植體，可以快速獲得甘薯組培苗。實(shí)現(xiàn)了利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)對甘薯進(jìn)行快速繁殖和高產(chǎn)栽培，也為甘薯遺傳轉(zhuǎn)化提供了必要基礎(chǔ)。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種用甘薯葉柄進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)和分化的方法。

背景技術(shù)

甘薯(Ipomoea batatas(L.)Lam.)屬于旋花科(Convolvulaceae)，一年生或多年生草質(zhì)蔓性藤本植物。組織培養(yǎng)不受地點(diǎn)季節(jié)制約可連續(xù)快速繁殖，且操作簡單用時短、成熟種苗根系發(fā)達(dá)質(zhì)量高，能有效的降低生產(chǎn)成本和提高人員的生產(chǎn)效率。使其不再受到季節(jié)和產(chǎn)地的局限。

張玲等，使用葉片和莖尖做成外植體，葉片和莖尖對誘導(dǎo)結(jié)果的作用相差很大。用葉片可以達(dá)到95.69％。而莖尖的則為30.56％。兩者相差很大。且葉片明顯比莖尖有優(yōu)勢。周志林等，使用了莖段、葉片、葉柄作為實(shí)驗(yàn)部位進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。綜合來說，莖段的分化能力最高，其次是葉片，之后是葉柄。朱愛科等，就愈傷誘導(dǎo)這一方面，研究出葉片和葉柄的出愈率是相同的，都為100％。這可能與甘薯的品種有關(guān)，研究品種較容易生成愈傷。且馬苗鵬等用莖段、葉片、葉柄、莖尖為刺激部位進(jìn)行比較。檢測得到，最后能力強(qiáng)弱的排名是葉柄＞葉片＞莖尖＞莖段。

激素對于體外研究過程來說是一個不可或缺的條件。而且激素量的高低也有不同的效果。只有在激素濃度適宜時才會誘導(dǎo)出愈傷。徐茜等，用6-BA、NAA、2，4-D、KT、IAA適當(dāng)?shù)倪M(jìn)行組合成7種組合的處理組，進(jìn)行離體培養(yǎng)。在試驗(yàn)的幾個誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，都能產(chǎn)生出愈傷，而且能夠保證可以達(dá)到100％的程度。劉春月等，以6-BA、NAA兩種激素不同濃度的配比，通過大量試驗(yàn)研究，這樣激素的使用更有利于愈傷的誘導(dǎo)，且生長情況良好，不易老化。

一般植物培養(yǎng)中較普通的就是先分化出芽，再在新芽幼莖的基部長出須根，從而慢慢長成完整的植株。而甘薯的分化跟其他植物有所不同，其先分化出根，再由根上慢慢發(fā)芽，生長壯大。因?yàn)橄壬瑢ρ康姆只瘯幸种谱饔茫裕适硌糠只璧臅r間會較長。張先云等，用枝條為外植體，選擇3種激素進(jìn)行組合的培養(yǎng)基，進(jìn)行控制整個過程的實(shí)驗(yàn)。判斷出了最佳搭配。最終，成為作用部位愈傷形成、分化和增殖的最適培養(yǎng)基。

無論在食品營養(yǎng)保健方面還是在紡織、飼料、能源方面，甘薯都具有不可忽視的重要作用。隨著其需求量的不斷增加，甘薯組織培養(yǎng)技術(shù)顯得更加實(shí)用。組織培養(yǎng)以其適應(yīng)性廣、繁殖力強(qiáng)、栽培簡便、成本低等優(yōu)點(diǎn)，可以實(shí)現(xiàn)培養(yǎng)優(yōu)良甘薯品種、生產(chǎn)無菌苗、建立快速繁殖體系。為優(yōu)良甘薯的高效供應(yīng)提供一大助力。如果這項(xiàng)技術(shù)可以應(yīng)用到生活中，將會給我們的經(jīng)濟(jì)和生活帶來巨大的沖擊。它不僅可以獲得更高的經(jīng)濟(jì)效益，還為環(huán)境的改善和城市的改造提供了幫助，為新品種的開發(fā)打下基礎(chǔ)。現(xiàn)有技術(shù)條件下，甘薯愈傷組織的誘導(dǎo)及分化率較低。

發(fā)明內(nèi)容

為解決上述問題，本發(fā)明提供了用甘薯葉柄進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)和分化的方法，顯著提高了甘薯愈傷組織的誘導(dǎo)及分化率。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采取的技術(shù)方案為：

用甘薯葉柄進(jìn)行愈傷組織誘導(dǎo)和分化的方法，包括如下步驟：

S1、將甘薯幼苗的葉柄用75％的酒精溶液處理30秒，10％的NaClO溶液浸泡處理5分鐘后，用0.1％HgCl₂溶液浸泡3分鐘，無菌水沖洗；