[發明專利]一種腐爛莖線蟲離體培養方法

在審

• 申請號: 201710429525.0
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN106973867A
• 公開（公告）日: 2017-07-25
• 發明（設計）人: 李惠霞;徐鵬剛;劉永剛;李敏權;劉霞霞
• 申請（專利權）人: 甘肅農業大學
• 主分類號: A01K67/033
• 分類號: A01K67/033
• 代理公司: 北京知本村知識產權代理事務所11039
• 代理人: 劉江良

1.一種腐爛莖線蟲離體培養方法，其特征在于，包括如下步驟：

第一步，培養基上培養鐮刀菌（Fusarium spp.），待其長出菌絲體后；第二步，將腐爛莖線蟲培養于所述長有菌絲的培養基中。

2.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，第一步所述培養基為蔗糖瓊脂（PDA）培養基。

3.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，其中第二步所述線蟲制備成懸浮液后再養于所述長有菌絲的培養基中。

4.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，其中第一步所述培養鐮刀菌是在培養皿上進行，待菌絲長匯培養皿后，用于培養所述線蟲。

5.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，第二步中將線蟲懸浮液均勻地分布于長滿菌絲的培養基中，將培養容器用封口膜封好，將正置于25℃下暗培養。

6.如權利要求5所述的培養方法，其特征在于，所述接種量為1000條/皿，培養皿直徑90mm。

7.如權利要求5所述的培養方法，其特征在于，正置培養2～4d后將培養皿蓋朝下放置，繼續培養25-35后，即可收集到大量的線蟲。

8.如權利要求1所述的培養方法，其特征在于，第二步中，所述線蟲從病薯中分離。

9.如權利要求8所述的培養方法，其特征在于，第二步中，線蟲懸浮液的具體制備方法如下：在漏斗上連一乳膠管，乳膠管的另一頭連一指形管，將漏斗放在漏斗架上，漏斗內放一鐵絲網，網上鋪兩層餐巾紙；將采集到的病薯用自來水沖洗干凈，用刀切小塊，輕輕放在紙上，從餐巾紙背面加入適量無菌水，使水漫過病害組織；24 h后取下指型管，靜置1-2min后，棄去上層水；然后用玻璃吸管將分離到的線蟲轉移至2 mL離心管中；加入35%的蔗糖溶液后，以3000 r/min離心2 min；取表層線蟲懸浮液，轉移至無菌水中，以3000 r/min離心2 min，棄上清液；然后用0.5%次氯酸鈉消毒2 min后，移入0.5%青霉素和0.5%硫酸鏈霉素混合液中消毒10 min，離心后吸出消毒液，用無菌水沖洗3遍后4℃保存備用。