[發(fā)明專利]一種固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針及其制備方法與應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710429175.8
• 申請(qǐng)日: 2017-06-08
• 公開（公告）號(hào): CN107356570B
• 公開（公告）日: 2020-10-27
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 徐賽;陳寶玖;高躍峰;李香萍;張金蘇
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 大連海事大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 大連至誠(chéng)專利代理事務(wù)所(特殊普通合伙) 21242
• 代理人: 楊威;董彬

1.一種固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法，包括以下步驟：

a.制備蛋白石光子晶體：將微球分散在水中，制成渾濁液，將玻璃基板垂直插入該渾濁液中，28-40℃恒溫20-30小時(shí)，制成蛋白石光子晶體，將所述蛋白石光子晶體放置到100-120℃環(huán)境中40-60分鐘增加其機(jī)械強(qiáng)度；

b.制備上轉(zhuǎn)換納米粒子：將聚醚酰亞胺、NaCl及稀土硝酸鹽放入乙二醇中進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，制成溶液一，將NH₄F和乙二醇加入另一容器中進(jìn)行充分?jǐn)嚢?，制成溶液二，將溶液二滴加至溶液一中，繼續(xù)攪拌至溶液澄清后裝入反應(yīng)釜，180-240℃反應(yīng)2-8小時(shí)，待反應(yīng)釜自然降溫至室溫后，離心收集，并用乙醇和去離子水離心清洗，得到上轉(zhuǎn)換納米粒子；

c.上轉(zhuǎn)換納米粒子功能化修飾：將上轉(zhuǎn)換納米粒子分散在PBS緩沖液中，加入上轉(zhuǎn)換納米粒子質(zhì)量10％-15％的活化生物素，在室溫下攪拌4-8小時(shí)，生物素通過(guò)酰胺鍵共價(jià)連接到上轉(zhuǎn)換納米粒子上，產(chǎn)物經(jīng)過(guò)離心收集并用PBS溶液清洗去除未連接的生物素，向溶液中加入親和素修飾的腫瘤標(biāo)記物捕獲抗體；

d.上轉(zhuǎn)換納米粒子與蛋白石光子晶體復(fù)合：將步驟c所得的修飾好的上轉(zhuǎn)換納米粒子分散在PBS緩沖液中，制成修飾上轉(zhuǎn)換納米粒子分散液，將步驟a所得的長(zhǎng)有蛋白石光子晶體的玻璃基板用PDMS封片后插入到所述修飾上轉(zhuǎn)換納米粒子分散液中，20-35℃恒溫至修飾上轉(zhuǎn)換納米粒子分散液的溶劑全部揮發(fā)，制成固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法，其特征在于：所述溶液一中，NaCl與稀土硝酸鹽的物質(zhì)的量比為2.5:1，NaCl與聚醚酰亞胺的質(zhì)量比為1:2.74，NaCl與乙二醇的質(zhì)量比為1:114.6，所述溶液二中，NH₄F與乙二醇的質(zhì)量比為1:75.4。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法，其特征在于：所述微球?yàn)槎趸?、聚甲基丙烯酸甲酯或聚苯乙烯?/p>

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法，其特征在于：所述腫瘤標(biāo)記物捕獲抗體為CEA捕獲抗體或CA-125捕獲抗體。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法，其特征在于：所述上轉(zhuǎn)換納米粒子為NaYF₄:Yb,Er，所述稀土硝酸鹽包括0.78-0.8摩爾份數(shù)的Y(NO₃)₃、0.18-0.2摩爾份數(shù)的Yb(NO₃)₃和0.02-0.05摩爾份數(shù)的Er(NO₃)₃。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針的制備方法，其特征在于：所述上轉(zhuǎn)換納米粒子為NaYF₄:Yb,Tm，所述稀土硝酸鹽包括0.79-0.8摩爾份數(shù)的Y(NO₃)₃、0.18-0.2摩爾份數(shù)的Yb(NO₃)₃和0.001-0.002摩爾份數(shù)的Tm(NO₃)₃。

7.一種固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針，其特征在于，由權(quán)利要求1至6中任意一項(xiàng)所述的方法制得。

8.一種腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)方法，其特征在于，使用權(quán)利要求7所述的固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)方法，其特征在于，過(guò)程如下：將含有腫瘤標(biāo)記物抗原的溶液與所述的固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針接觸，然后滴加BSA溶液作為封閉劑，再滴加相應(yīng)的染料標(biāo)記的腫瘤標(biāo)記物抗體溶液，經(jīng)過(guò)沖洗去除未連接的腫瘤標(biāo)記物抗體，通過(guò)固態(tài)上轉(zhuǎn)換熒光探針的光譜的變化檢測(cè)腫瘤標(biāo)記物的含量。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的腫瘤標(biāo)記物檢測(cè)方法，其特征在于，所述腫瘤標(biāo)記物為CEA或CA-125，所述染料為異硫氰酸熒光素或羅丹明B。