[發(fā)明專利]抑制心肌肥厚的重組蛋白基因及其表達(dá)產(chǎn)物和應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710427455.5
• 申請(qǐng)日: 2017-06-08
• 公開（公告）號(hào): CN107099538B
• 公開（公告）日: 2019-11-12
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 王擎;姚雨峰;陳秋云
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 華中科技大學(xué)
• 主分類號(hào): C12N15/12
• 分類號(hào): C12N15/12;C12N15/10;C07K14/47;C12N15/70;A61K38/17;A61P9/04;A61P9/10;A61P9/00
• 代理公司: 華中科技大學(xué)專利中心 42201
• 代理人: 許恒恒;李智

本發(fā)明公開了一種重組蛋白基因和包含該基因的重組質(zhì)粒，以及該重組質(zhì)粒表達(dá)蛋白的制備及應(yīng)用。該重組AGGF1蛋白能通過抑制心肌肥厚小鼠心臟的肥厚，改善小鼠心功能，抑制心肌細(xì)胞凋亡和心臟纖維化，最終抑制心衰。因此，所述重組AGGF1蛋白能制備抗心肌肥厚藥物，用于心肌肥厚疾病和心衰的治療。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，更具體地，涉及一種重組蛋白及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

心肌肥厚是機(jī)體對(duì)生理及病理上壓力所產(chǎn)生的一種適應(yīng)性應(yīng)答，它是心血管疾病患病病人死亡率升高的一個(gè)獨(dú)立危險(xiǎn)因素。心臟為了應(yīng)答壓力負(fù)荷，個(gè)體的心肌細(xì)胞開始機(jī)械性的拉伸并且激活細(xì)胞內(nèi)的促肥厚信號(hào)途徑，導(dǎo)致胚胎期的轉(zhuǎn)錄因子再次被激活，并且各種蛋白質(zhì)的合成增多，如各種結(jié)構(gòu)蛋白及收縮相關(guān)蛋白。這些蛋白合成增多會(huì)導(dǎo)致心肌結(jié)構(gòu)紊亂，心臟收縮力降低，氧耗增多，供血不足，最終會(huì)導(dǎo)致心力衰竭，心律失常或者猝死等。

諸如高血壓，心肌梗死，心臟瓣膜病變，動(dòng)脈粥樣硬化及一些遺傳性心臟病都會(huì)導(dǎo)致心肌肥厚的發(fā)生，往往我們認(rèn)為心肌肥厚是不可逆的。因此，如何有效控制心肌肥厚的發(fā)生，成為了臨床干預(yù)的基礎(chǔ)。探明心肌肥厚疾病分發(fā)病機(jī)理及尋找有效的干預(yù)方法，具有重要的臨床及研究意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的以上缺陷或改進(jìn)需求，本發(fā)明提供了一種重組蛋白及其應(yīng)用，其目的在于通過所述重組蛋白制備抗心肌肥厚及心衰的藥物，有效控制心肌肥厚的發(fā)生和臨床干預(yù)。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，按照本發(fā)明的一個(gè)方面，提供了一種抑制心肌肥厚的重組蛋白基因AGGF1，所述基因的核苷酸序列為SEQ ID NO：1所示的序列。

按照本發(fā)明的另一方面，提供了一種抑制心肌肥厚的重組蛋白基因AGGF1的克隆方法，使用SEQ ID NO：3所示的正向引物和SEQ ID NO：4所示的反向引物,應(yīng)用PCR方法從人的cDNA中克隆得到AGGF1基因。

按照本發(fā)明的另一方面，提供了一種表達(dá)抑制心肌肥厚的重組蛋白的重組質(zhì)粒，該質(zhì)粒由以下步驟制得：

(1)將AGGF1基因與His標(biāo)簽序列連接，所述AGGF1基因的核苷酸序列為SEQ ID NO：1所示的序列；

(2)將步驟(1)中得到的連接有His標(biāo)簽序列的AGGF1基因序列插入到表達(dá)載體的多克隆酶切位點(diǎn)處，得到重組質(zhì)粒。

優(yōu)選地，所述的表達(dá)載體為pet28a。

按照本發(fā)明的另一方面，提供了一種抑制心肌肥厚的重組蛋白，該蛋白的氨基酸序列為：

(1)由SEQ ID NO：2氨基酸序列所示；或

(2)與序列SEQ ID NO：2限定的氨基酸序列同源性在80％至100％編碼相同功能蛋白質(zhì)的氨基酸序列；或

(3)SEQ ID NO：2限定的氨基酸序列經(jīng)增加、缺失或替換一個(gè)或多個(gè)氨基酸，具有與序列SEQ ID No：2序列所示的蛋白質(zhì)具有同等活性的氨基酸序列。

按照本發(fā)明的另一方面，提供了一種抑制心肌肥厚的重組蛋白的制備方法，包括以下步驟：

(1)將人源AGGF1基因與His標(biāo)簽序列連接后，插入到原核表達(dá)載體pet28a的多克隆酶切位點(diǎn)處，構(gòu)建含有AGGF1基因的重組質(zhì)粒pet28a-AGGF1，所述AGGF1基因的核苷酸序列為SEQ ID NO：1所示的序列；；

(2)將步驟(1)所述的的重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染進(jìn)入原核細(xì)胞，并通過抗生素抗性篩選，得到具有抗生素抗性的陽(yáng)性細(xì)胞克隆；

(3)將步驟(2)中得到的陽(yáng)性細(xì)胞克隆擴(kuò)增培養(yǎng)后，分離純化后得到所述的抑制心肌肥厚的重組蛋白。