[發明專利]一種緩解眼干癥狀的菊花有效成分的研究方法

在審

• 申請號: 201710426698.7
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN108205030A
• 公開（公告）日: 2018-06-26
• 發明（設計）人: 程雪翔
• 申請（專利權）人: 北京京華醫藥有限公司
• 主分類號: G01N30/02
• 分類號: G01N30/02;G01N21/64;G01N21/31;G01N27/62;G01N33/50
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明涉及一種菊花有效成分的研究方法，尤其是一種緩解眼干癥狀的菊花有效成分的研究。采用色譜、波普等技術對明鉬菊樣品進行定性、定量分析，采用采用原子熒光、原子吸收、或ICP?MS(電感耦合等離子體質譜)等方法測定明鉬菊的鉬含量，通過建立藍光誘導HRPE細胞(人視網膜色素上皮細胞)的光損傷體外藥效評價模型進行藥效活性跟蹤，觀察明鉬菊提取物、單體化合物對光損傷HRPE細胞氧化應激狀態的影響，評估明鉬菊對眼干癥狀的緩解作用。

技術領域

本發明涉及一種菊花有效成分的研究方法，尤其是一種緩解眼干癥狀的菊花有效成分的研究。

背景技術

菊花是菊科植物。菊花Chrysanthemum morifolium Ramat鱗托菊的干燥頭狀花序，是中國常用中藥，具有疏風、清熱、明目、解毒之功效。主要治療風熱感冒、頭痛、眩暈、目赤、心胸煩熱、疔瘡、腫毒等癥。現代藥理研究表明，菊花具有治療冠心病、降低血壓、預防高血脂、抗菌、抗病毒、抗炎、抗衰老等多種藥理活性。《神農本草經》記載：白菊花“主諸風頭眩、腫痛、目欲脫、皮膚死肌、惡風濕痹，久服利氣”《本草綱目》中也有記載菊花“性甘、味寒，具有散風熱、平肝明目之功效”。現代藥理分析表明，菊花里含有豐富的維生素A和綠原酸，是維護眼睛健康的重要物質。

由于社會發展，電視、電腦進入每家每戶，社會壓力增大，致使肝火旺盛，用眼過度導致雙眼干澀，菊花茶有效明目，緩解眼干澀疲勞。隨著電腦成為一種必備的辦公工具，輻射嚴重，眼部干澀疲勞，是都市人的通病。

菊花因產地和品種不同，其化學成分有一定的差異。目前對藥典收載的四種來源的菊花的化學成分研究均有報道。研究發現，菊花的化學成分比較復雜，其中黃酮類化合物、三萜類化合物和揮發油是其主要有效成分。

發明內容

本發明的目的在于，提供一種緩解眼干癥狀的菊花有效成分的研究方法，其重點在于，研究菊花有效成分的緩解眼干作用的效果。其他還包括，菊花物質基礎和有效成分單體化合物的前提研究。

采用HPLC-DAD，MS等技術對不同來源明鉬菊樣品進行定性、定量分析，建立明鉬菊道地性特征圖譜。

采用采用原子熒光、原子吸收、或ICP-MS(電感耦合等離子體質譜)等方法測定不同來源明鉬菊的鉬含量，確定明鉬菊鉬含量質量控制技術要求。

采用色譜、波普等技術對菊花的化學成分進行分離機結構鑒定，確定明鉬菊的藥效物質基礎，為本品藥效活性及其質量研究提供單體化合物。

采用藍光誘導HRPE細胞(人視網膜色素上皮細胞)的光損傷體外藥效評價模型進行藥效活性跟蹤，觀察明鉬菊提取物、單體化合物對光損傷HRPE細胞氧化應激狀態的影響，檢測細胞存活率、凋亡率，分析細胞核形態，觀察受試藥物對細胞凋亡等方面的調控作用。評估明鉬菊對眼干癥狀的緩解作用。

具體實施方式

采用色譜、波普等技術對菊花的化學成分進行分離機結構鑒定，并確定明鉬菊的藥效物質基礎，提供單體化合物用于研究。

用相同光照強度的藍光照射體外培養相同細胞培養終止時間的人RPE細胞相同時間，分為3組，A組：體外培養的人RPE細胞的營養液中含有明鉬菊提取液；B組：體外培養的人RPE細胞的營養液含有從明鉬菊分離出的單體化合物液體；C組：體外培養的人RPE細胞的營養液中不含有上述物質。利用末端脫氧核酸轉移酶介導的原位缺口末端標記(TUNEL)、熒光素標記的連接素V/碘化吡啶(Annexin V-FITC/PI)雙染流式細胞檢測、透射電子顯微鏡等手段觀察細胞凋亡。統計細胞存活率和凋亡率：