[發明專利]阻斷UBE2M介導Neddylation修飾在腎細胞癌治療中的應用

在審

• 申請號: 201710426399.3
• 申請日: 2017-06-08
• 公開（公告）號: CN107158387A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 徐博;王春喜;魏偉;管旌旌
• 申請（專利權）人: 吉林大學第一醫院
• 主分類號: A61K45/00
• 分類號: A61K45/00;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 吉林長春新紀元專利代理有限責任公司22100
• 代理人: 王怡敏

技術領域

本發明涉及生物醫學技術領域一個新型的腎細胞癌治療靶點，具體涉及阻斷UBE2M介導的Neddylation修飾信號通路在腎細胞癌治療靶點中的應用。

背景技術

腎細胞癌（renal cell carcinoma，RCC）是起源于腎實質泌尿小管上皮系統的惡性腫瘤，占腎臟惡性腫瘤的80％-90％，占成人惡性腫瘤的2％至3％。 目前，外科手術（根治性腎切除手術和保留腎單位手術）是局限性腎癌的首選治療方法，可以達到完全治愈。對于局部進展性腎癌則以手術治療為主，術后輔助細胞因子或分子靶向治療的綜合治療。而轉移性腎癌尚無統一標準治療方案，研究表明分子靶向藥物可以顯著延長患者的生存期。2006年起，NCCN和EAU將分子靶向藥物（索拉菲尼、舒尼替尼、替西羅莫斯等）作為轉移性腎癌治療的一、二線臨床治療用藥。它們中的大多數屬于激酶抑制劑，通過抑制腫瘤血管的生長，達到抗腫瘤的作用，延長患者的生存期。但分子靶向藥物的毒副作用（手足皮膚反應、乏力、白細胞減少、高血壓、貧血、口舌炎等）限制其在臨床治療中的廣泛應用，部分患者因此需要調整藥物劑量，甚至終止治療。因此，尋找和發現新的腎細胞癌治療靶點并據此研發新型的分子靶向藥物，對于腎細胞癌的治療具有重要的臨床應用價值。

類泛素化修飾Neddylation是一種新型的蛋白翻譯后修飾方式，通過類泛素樣蛋白NEDD8（neural precursor cell-expressed developmentally downregulated 8）特異性地與底物蛋白共價結合，調控多種蛋白復合體的結構和功能，在細胞正常生理活動的多個關鍵環節中具有重要的調控作用。然而，Neddylation修飾的異常激活與多種惡性腫瘤的發生和發展密切相關。所以靶向針對Neddylation修飾信號通路有望成為新型的抗腫瘤靶點。Neddylation修飾信號通路的關鍵酶主要包括NEDD8活化酶E1、NEDD8結合酶E2和NEDD8連接酶E3。NEDD8結合酶E2為高度保守的蛋白質，目前研究僅發現有2種，分別是UBE2M(Ubiquitin-binding enzyme E2M, UBC12)和UBE2F(ubiquitin-binding enzyme E2F)。然而，Neddylation修飾以及NEDD8結合酶E2是否能夠作為腎細胞癌治療靶點及作用機制仍未知。

發明內容

本發明的目的在于提供一種阻斷UBE2M介導Neddylation修飾在腎細胞癌治療中的應用，為研發新型的分子靶向治療藥物，提供一種阻斷UBE2M介導的Neddylation修飾作為治療腎細胞癌的新靶點。本發明設計了sh-control、sh-UBE2F和sh-UBE2M等RNA干擾相關質粒，構建穩定敲低UBE2M或者UBE2F蛋白表達水平的腎癌細胞系，通過實驗發現敲低UBE2M顯著抑制腎癌細胞的增殖。進一步通過Neddylation修飾特異性小分子抑制劑MLN4924對腎癌細胞的顯著殺傷作用,證明了阻斷UBE2M介導的Neddylation修飾在抑制腎癌細胞增殖活力上起著關鍵作用。因此，阻斷UBE2M介導的Neddylation修飾信號通路是一種潛在的治療腎細胞癌的新型靶點，具有很強的臨床應用價值。

本發明的上述目的通過以下技術方案實現：

阻斷UBE2M介導的Neddylation修飾信號通路作為藥物靶點在制備抗腎細胞癌藥物中的應用。

阻斷UBE2M介導的Neddylation修飾信號通路作為藥物靶點在制備抑制腎細胞癌增殖試劑中的應用。

通過靶向抑制UBE2M的表達或功能，實現靶向抑制腎細胞癌的生長。

靶向抑制UBE2M表達的方法為：通過慢病毒介導shRNA轉入腎癌細胞中，敲低腎癌細胞內UBE2M的表達。

抑制劑選自靶向于UBE2M蛋白編碼序列，且能夠抑制UBE2M基因轉錄與蛋白表達的shRNA。

所述的shRNA序列為GCGGATCCAGAAGGACATAAA。

本發明的有益效果在于：本發明通過實驗證實了通過阻斷UBE2M介導的Neddylation修飾信號通路可抑制腎癌細胞的增殖。進一步通過Neddylation修飾特異性小分子抑制劑MLN4924對腎癌細胞的顯著殺傷作用，證明了阻斷UBE2M介導的Neddylation修飾在抑制腎癌細胞增殖活力上起著關鍵作用。因此，阻斷UBE2M介導的Neddylation修飾信號通路是一種潛在的治療腎細胞癌的新型靶點，具有很強的臨床應用價值。

附圖說明