[發(fā)明專利]一種免標(biāo)記磷光探針定量檢測三磷酸腺苷的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710423458.1
• 申請(qǐng)日: 2017-06-07
• 公開（公告）號(hào): CN109001165B
• 公開（公告）日: 2020-11-20
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李妍;熊艷;張菲;靳晴
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津師范大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N21/64
• 分類號(hào): G01N21/64
• 代理公司: 天津創(chuàng)智天誠知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 12214
• 代理人: 王秀奎;李薇

1.一種免標(biāo)記磷光探針定量檢測三磷酸腺苷的方法，其特征在于：包括以下步驟：

先將Tris-HCl緩沖溶液、ATP適配體、ATP溶液混合加高純水定容，反應(yīng)完成后，加入MPA包覆的Mn摻雜ZnS量子點(diǎn)母液混合均勻形成檢測系統(tǒng)，其中的ATP適配體的基因序列為ACCTGGGGGAGTATTGCGGAGGAAGGT，MPA包覆的Mn摻雜ZnS量子點(diǎn)具有磷光性質(zhì)，ATP適配體使得量子點(diǎn)磷光猝滅，ATP與ATP適配體特異性結(jié)合，隨著ATP的濃度增加，阻礙ATP適配體與量子點(diǎn)的結(jié)合，從而使得量子點(diǎn)磷光恢復(fù)，量子點(diǎn)的磷光恢復(fù)過程磷光強(qiáng)度和檢測體系中ATP的濃度呈線性關(guān)系，其線性方程為：y＝317.7+0.015x，其中y為磷光強(qiáng)度，x為檢測體系中ATP的濃度，擬合度為0.95，線性范圍為8-9000nmol/L，最低檢出限為6nmol/L。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免標(biāo)記磷光探針定量檢測三磷酸腺苷的方法，其特征在于：所述Tris-HCl緩沖溶液、ATP適配體、ATP溶液加高純水定容，反應(yīng)25-30min后，然后加入MPA包覆的Mn摻雜ZnS量子點(diǎn)母液。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免標(biāo)記磷光探針定量檢測三磷酸腺苷的方法，其特征在于：加入MPA包覆的Mn摻雜ZnS量子點(diǎn)母液后20-25min，檢測系統(tǒng)的磷光強(qiáng)度。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免標(biāo)記磷光探針定量檢測三磷酸腺苷的方法，其特征在于：所述MPA包覆的Mn摻雜ZnS量子點(diǎn)母液的濃度為200-250mg/L。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免標(biāo)記磷光探針定量檢測三磷酸腺苷的方法，其特征在于：所述檢測體系中ATP適配體的濃度為0.4-0.6μM。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免標(biāo)記磷光探針定量檢測三磷酸腺苷的方法，其特征在于：所述Tris-HCl緩沖溶液的pH＝7-7.4。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免標(biāo)記磷光探針定量檢測三磷酸腺苷的方法，其特征在于：所述Tris-HCl緩沖溶液、ATP適配體溶液、待檢測ATP溶液的體積比為2體積份:2體積份:2體積份:1體積份，整個(gè)檢驗(yàn)系統(tǒng)定容至500μL。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種免標(biāo)記磷光探針定量檢測三磷酸腺苷的方法，其特征在于：向離心管中依次加入50μL(0.02mol/L)pH＝7.4Tris-HCl緩沖溶液，再向其中加入50μL4μM ATP適配體溶液作為磷光猝滅劑，加入50μL待檢測ATP溶液作為磷光恢復(fù)劑，加高純水定容至475μL，反應(yīng)30min后，再加入25μL 200mg/L MPA包覆的Mn摻雜ZnS量子點(diǎn)母液，搖勻靜置20min后，將熒光分光光度計(jì)調(diào)成磷光法的檢測模式，設(shè)置激發(fā)波長為315nm，測定磷光強(qiáng)度，通過y＝317.7+0.015x，可計(jì)算出待檢測ATP溶液中ATP的濃度，其中y為磷光強(qiáng)度，x為檢測體系中ATP的濃度。