[發明專利]一種表達雙拷貝gD基因的重組牛傳染性鼻氣管炎病毒

有效

• 申請號: 201710415514.7
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN108977413B
• 公開（公告）日: 2021-02-23
• 發明（設計）人: 郭愛珍;劉瑞寧;鄧明亮;李漢雄;陳穎鈺;胡長敏;陳煥春
• 申請（專利權）人: 華中農業大學
• 主分類號: C12N7/01
• 分類號: C12N7/01;A61K39/265;A61P31/22;C12R1/93
• 代理公司: 武漢宇晨專利事務所 42001
• 代理人: 張紅兵

本發明屬于動物病毒學和基因工程技術領域，具體涉及一種表達雙拷貝gD基因的重組牛傳染性鼻氣管炎病毒。將牛傳染性鼻氣管炎病毒免疫原性gD基因胞外區插入到牛傳染性鼻氣管炎△gG/△TK雙基因缺失毒株的TK基因位置，表達出雙拷貝gD基因。該重組病毒的增殖沒有改變，但其免疫原性得到提高。重組牛傳染性鼻氣管炎病毒IBRV△gG/△TK/gD+，保藏在中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC NO：V201552，本發明還公開了重組牛傳染性鼻氣管炎病毒IBRV△gG/△TK/gD+在制備牛傳染性鼻氣管炎基因工程疫苗中的應用。

技術領域

本發明屬于動物病毒學和基因工程技術領域，具體涉及一種表達雙拷貝gD基因的重組牛傳染性鼻氣管炎病毒。本發明將牛傳染性鼻氣管炎病毒免疫原性最好的gD蛋白基因胞外區插入到牛傳染性鼻氣管炎△gG/△TK雙基因缺失疫苗毒株的TK基因位置，表達出雙拷貝gD基因。該重組病毒的增殖沒有改變，但其免疫原性得到提高。本發明還包括利用該重組病毒制備牛傳染性鼻氣管炎病毒疫苗及其應用。

背景技術

牛傳染性鼻氣管炎(Infectious bovine rhinotracheitis，IBR)又稱“紅鼻病”，“壞死性鼻炎”，是由牛傳染性鼻氣管炎病毒(Infectious bovine rhinotracheitis，IBRV)或稱牛皰疹病毒Ⅰ型(Bovine herpesvirus 1，BoHV‐1)感染牛引起的一種急性、熱性、接觸性傳染病，主要臨床特征為上呼吸道及氣管炎、黏膜炎、高熱、流鼻汁、呼吸困難等，是引起牛呼吸道疾病綜合征(Bovine respiratory disease complex，BRDC)的病原之一，給世界養牛業造成了巨大損失(Jones and Chowdhury,2007)。此外，IBRV感染機體后可潛伏感染于三叉神經節，當機體受到應激因素刺激時病毒被激活增殖，導致擴散和傳播并致病，給該病的控制和消滅帶來了極大困難(Nuotio et al.,2007)。目前只有少數歐洲國家已經根除了本病，其他一些國家正在實施撲滅計劃，或使用標記疫苗區分自然感染和疫苗接種的牛群，以便于更好的進行監控和防制。此外，IBRV可作為活病毒載體表達其他重要病原的免疫原性基因研制重組多價疫苗，達到“一針防多病”的目的。

IBRV病毒有囊膜，球形，病毒粒子由核酸芯髓、衣殼和囊膜組成，核衣殼內含有雙鏈DNA。病毒粒子的直徑約120‐200nm。衣殼為正二十面體立體對稱，外觀呈六角形，有162個殼粒，其中包括150個六聚體和12個五聚體，殼粒互相連接呈放射狀排列且有中空軸孔。IBRV的基因組約135kb，G+C含量為72％。IBRV的基因組結構中，兩個反向重復序列(IRS和TRS，各為11kb)位于短獨特區(US，13kb)的兩側，序列相同方向相反，因而短區能夠反轉方向，使病毒DNA具有兩種異構體(Mittal and Field,1989)。IBRV基因組有73個編碼框(Openreading frame，ORF)，編碼73個蛋白質。按病毒在體外細胞培養增殖的重要性分類，屬于復制增殖必需的蛋白有33個，包括糖蛋白gB、gD、gH、gL和gK等；非必需蛋白有36個，包括糖蛋白(gC、gE、gI、gG、gM)、胸苷激酶蛋白(TK)、脫氧尿苷三磷酸酶蛋白、包膜蛋白(UL49、US9)、膜蛋白(UL49.5)和調節蛋白(US3、bICP0、bICP22、Circ)等(Robinson et al.,2008)；按是否為病毒結構組分進行分類，可分為結構蛋白和非結構蛋白，結構蛋白有33個，其中13個為包膜蛋白，約10個為糖蛋白(Schwyzer and Ackermann,1996)。這10個糖蛋白中，6個位于UL區，為gK(UL53)、gC(UL44)、gB(UL27)、gH(UL22)、gM(UL10)和gL(UL1)，而另外4個糖蛋白位于US區，為gG(US4)、gD(US6)、gI(US7)和gE(US8)(Muylkens et al.，2007)。