[發明專利]羊膜上皮細胞和羊膜間充質干細胞混合物在制備治療糖尿病藥物中的應用

在審

• 申請號: 201710414613.3
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN107375332A
• 公開（公告）日: 2017-11-24
• 發明（設計）人: 張璐;梁磊;戰陽;王玨
• 申請（專利權）人: 吉林省中科生物工程股份有限公司
• 主分類號: A61K35/50
• 分類號: A61K35/50;A61K35/28;A61P3/10;C12N5/071;C12N5/0775
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙)11371
• 代理人: 吳開磊

1.羊膜上皮細胞和羊膜間充質干細胞混合物在制備治療糖尿病藥物中的應用。

2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述應用還進一步包括從胎盤上分別分離得到羊膜上皮細胞和羊膜間充質干細胞，然后將分離得到的羊膜上皮細胞和羊膜間充質干細胞分別培養后混合，以制備羊膜上皮細胞和羊膜間充質干細胞混合物的步驟。

3.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述羊膜上皮細胞的分離和培養包括如下步驟：

(1)將羊膜從胎盤組織上剝離后，以含3％雙抗的HBSS緩沖溶液進行清洗；

(2)將清洗后的羊膜剪碎，并用胰酶消化處理；

(3)將消化處理后得到的消化液過篩后，收集細胞濾液，并離心處理；

(4)將離心處理得到的細胞用培養基懸浮后接種，并培養；

(5)當培養的細胞匯合度達到80～90％后，加入胰酶消化，然后加入培養基終止消化，并傳代培養，即得人羊膜上皮細胞。

4.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(2)中所述胰酶消化處理是在33～39℃條件下用胰酶消化處理20～40mi n，并消化處理2～4次。

5.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(3)中所述過篩是以孔徑為200～400目的篩網進行過濾。

6.根據權利要求3所述的應用，其特征在于，步驟(5)中所述胰酶消化是在33～39℃條件下用胰酶消化處理3～10mi n。

7.根據權利要求2所述的應用，其特征在于，所述羊膜間充質干細胞的分離和培養包括如下步驟：

(1)將羊膜從胎盤組織上剝離，并以含3％雙抗的HBSS緩沖溶液清洗；

(2)將清洗后的羊膜剪碎后，加入胰酶處理；

(3)將胰酶處理后的組織清洗后，加入膠原酶I消化處理；

(4)將消化處理后的組織過濾，并離心；

(5)用培養液將離心后得到的細胞懸浮后接種培養；

(6)培養后細胞匯合度達到80～90％后，加入胰酶消化，然后加入培養基終止消化，并傳代培養，即得到人羊膜間充質干細胞。

8.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，步驟(3)中所述消化處理為以濃度為0.3～0.6mg/ml的膠原酶I消化處理。

9.根據權利要求8所述的應用，其特征在于，步驟(3)中所述消化處理為在35～39℃條件下消化處理1～2h。

10.根據權利要求7所述的應用，其特征在于，步驟(6)中所述胰酶消化是在35～38℃條件下消化3～6mi n。