[發明專利]引物探針組合、PCR反應液、試劑盒及其應用

在審

• 申請號: 201710414089.X
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN107338286A
• 公開（公告）日: 2017-11-10
• 發明（設計）人: 馬東禮;姜含芳;劉孝榮;陳虹宇;蔡德豐;朱純青;李俊;農文燕
• 申請（專利權）人: 深圳市兒童醫院;深圳市泰爾迪恩生物信息科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11
• 代理公司: 深圳市中原力和專利商標事務所(普通合伙)44289
• 代理人: 謝芝柏

1.一種引物探針組合，其特征在于，包括用于檢測百日咳鮑特氏菌的引物和用于檢測百日咳鮑特氏菌的探針，所述用于檢測百日咳鮑特氏菌的引物包括上游引物和下游引物，其中，

所述用于檢測百日咳鮑特氏菌的上游引物如序列表中SEQ ID NO.1所示；

所述用于檢測百日咳鮑特氏菌的下游引物如序列表中SEQ ID NO.2所示；

所述用于檢測百日咳鮑特氏菌的探針如序列表中SEQ ID NO.3所示；

其中所述用于檢測百日咳鮑特氏菌的探針的5＇端連接有FAM熒光基團，其3＇端連接有TAMRA淬滅基團。

2.一種PCR反應液，其特征在于，包括權利要求1所述的引物探針組合。

3.根據權利要求2所述的PCR反應液，其特征在于，所述用于檢測百日咳鮑特氏菌的探針的上游引物和用于檢測百日咳鮑特氏菌的探針的下游引物的終濃度均為0.8μM，所述用于檢測百日咳鮑特氏菌的探針的終濃度為0.4μM。

4.根據權利要求2所述的PCR反應液，其特征在于，所述PCR反應液還包括熒光定量PCR擴增試劑、內標質粒、用于擴增內標質粒中內標片段的引物和用于檢測內標片段的探針，所述用于擴增內標質粒中內標片段的引物包括內標片段上游引物和內標片段下游引物，其中，

所述內標片段上游引物如序列表中SEQ ID NO.4所示；

所述內標片段下游引物如序列表中SEQ ID NO.5所示；

所述用于檢測內標片段的探針如序列表中SEQ ID NO.6所示；

其中，所述用于檢測內標片段的探針的5＇端連接有HEX熒光基團，其3＇端連接有TAMRA淬滅基團。

5.根據權利要求4所述的PCR反應液，其特征在于，所述內標片段上游引物和所述內標片段下游引物的終濃度均為0.8μM，所述用于檢測內標片段的探針的終濃度為0.4μM。

6.根據權利要求4所述的PCR反應液，其特征在于，所述內標質粒為以pUC57為載體的內標片段重組質粒，其終濃度為1×10³copy/ml。

7.根據權利要求6所述的PCR反應液，其特征在于，所述內標質粒中內標片段的DNA序列如序列表中SEQ ID NO.7所示。

8.一種試劑盒，其特征在于，包括權利要求2-7中任一項所述的PCR反應液。

9.根據權利要求8所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括陰性質控品、陽性質控品及工作標準品。

10.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述陰性質控品為生理鹽水。

11.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述陽性質控品為1×10⁵copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質粒。

12.根據權利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述工作標準品包括第一工作標準品、第二工作標準品、第三工作標準品和第四工作標準品，其中，

所述第一工作標準品為1×10³copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質粒；

所述第二工作標準品為1×10⁴copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質粒；

所述第三工作標準品為1×10⁵copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質粒；

所述第四工作標準品為1×10⁶copy/ml的以pUC57為載體的百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質粒。

13.根據權利要求11或12所述的試劑盒，其特征在于，所述百日咳鮑特氏菌的基因片段重組質粒的DNA序列如序列表中SEQ ID NO.8所示。

14.一種如權利要求8所述的試劑盒在檢測百日咳鮑特氏菌中的應用。