[發明專利]一種微生態制劑及其制備方法

在審

• 申請號: 201710413765.1
• 申請日: 2017-06-05
• 公開（公告）號: CN107164265A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發明（設計）人: 黃福標;譚春萍;楊遠澄;周貴金
• 申請（專利權）人: 南寧學院
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12N1/16;C02F3/34;C12R1/125;C12R1/225;C12R1/01
• 代理公司: 貴陽派騰陽光知識產權代理事務所(普通合伙)52110
• 代理人: 谷慶紅

技術領域

本發明涉及一種復合微生態制劑領域，尤其是一種污水脫氮除磷微生態制劑及其制備方法。

背景技術

目前，我國水環境污染相當嚴重，全國七大江河水系中，40％左右水質劣于五類標準；全國75％的湖泊出現不同程度的富營養化；城市河段污染突出；沿海河口地區和城市附近海域污染污染嚴重，赤潮發生頻次增加，面積擴大。水環境的污染已直接威脅著城市飲用水的安全和人民的健康。所以，對受污染的江河湖泊水體進行修復，已是社會經濟發展及生態環境建設的迫切需要。

水體富營養化(eutrophication)指的是水體中N、P等營養鹽含量過多而引起的水質污染現象。其實質是由于營養鹽的輸入輸出失去平衡性，從而導致水生態系統物種分布失衡，單一物種瘋長，破壞了系統的物質與能量的流動，使整個水生態系統逐漸走向滅亡。

氮和磷是生物的重要營養源，目前化肥、洗滌劑和農藥使用普遍，天然水體中氮、磷含量急劇增加，導致水體富營養化，水體中藍藻、綠藻大量繁殖，水體缺氧并產生毒素，使水質惡化，對水生生物和人體健康產生很大的危害。

使用微生物進行水體凈化是目前應用較多的水質凈化方法，常用于江河湖泊水體凈化、污水治理及修復的生物產品，由多種微生物菌群組成，采用生物工程手段對自然微生物進行改性、強化、馴化培養而成的高效專用微生物應用于水體凈化方面。

國內目前使用微生物凈水方面的應用日益被接受和重視，但研究僅于起步階段。在應用方面，國內獨立開發的主要是一些單一菌株，如光合細菌、芽孢桿菌、蛭弧菌等；復合制劑主要是仿制或引進國外的商品，且多數是對生長速率、餌料轉化率、存活率等方面的數據，還沒有用更科學的研究手段和內容評價作用機理和使用效果。

發明內容

為了解決現有技術中存在的上述技術問題，本發明提供一種用于凈化富營養化水體的復合微生態制劑，具體是通過以下技術方案得以實現的：

以枯草芽孢桿菌及約氏不動桿菌為主要菌群，以乳酸桿菌、酵母菌為輔助菌群配置微生態制劑；其中枯草芽孢桿菌40-60％，約氏不動桿菌20-40％，乳酸桿菌10-20％，酵母菌10-20％。

具體制備方法：

(1)原菌種斜面培養：將冷凍保藏管中的枯草芽孢桿菌、約氏不動桿菌、乳酸桿菌、及酵母菌分別在斜面中活化，之后分別置于90mm培養皿中進行純化，得枯草芽孢桿菌斜面菌種、約氏不動桿菌斜面菌種、乳酸桿菌斜面菌種、及酵母菌斜面菌種，備用；

(2)原菌種液體培養：將枯草芽孢桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅰ中，之后于28℃-30℃厭氧鎢絲燈光照培養5-7天得枯草芽孢桿菌原菌液；將約氏不動桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅱ中，接著于25℃-28℃下好氧培養3-5天得約氏不動桿菌原菌液；將乳酸桿菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅲ中，接著于37℃下厭氧培養1-2天得乳酸桿菌原菌液；將酵母菌斜面菌種接種于已滅菌的液體培養基Ⅳ中，之后于28℃-30℃下好氧培養3天得酵母菌原菌液；

(3)一級種子培養：將枯草芽孢桿菌原菌液、約氏不動桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液、及酵母菌原菌液按枯草芽孢桿菌40-60％，約氏不動桿菌20-40％，乳酸桿菌10-20％，酵母菌10-20％的菌量比接種于已滅菌的發酵培養基Ⅰ中進行培養，具體地：先接種約氏不動桿菌原菌液、酵母菌原菌液并于28℃-30℃下好氧培養3天，然后再接種枯草芽孢桿菌原菌液、乳酸桿菌原菌液37℃厭氧培養3天，得復合微生態制劑的一級種子；

(4)二級種子培養：將所得的一級種子按5％的接種量接種于已滅菌的發酵培養基Ⅱ中，并于28℃-30℃下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，得復合微生態制劑的二級種子；

(5)成品培養：將所得的二級種子按5％的接種量接種至已滅菌的發酵培養基Ⅲ中，并于28℃-30℃下先好氧培養3-5天再厭氧培養3-5天，獲得所述復合微生態制劑的成品；

其中，步驟(2)中所用液體培養基I-IV分別為：

液體培養基Ⅰ的組分：酵母粉10克、磷酸氫二鉀1克、硫酸鎂0.5克、瓊脂20克、水1000ml、PH7.0-7.2；

液體培養基Ⅱ的組分：硝酸鈉1克、硫酸鎂0.03克、硫酸錳0.01克、磷酸氫二鉀0.8克、碳酸鈉1克、過磷酸鈣0.25克、水1000ml、PH自然；

液體培養基Ⅲ的組分：蛋白胨10克、牛肉膏10克、酵母粉5克、葡萄糖5克、乙酸鈉5克、檸檬酸二胺2克、吐溫801ml、磷酸氫二鉀2克、硫酸鎂0.58克、硫酸錳0.28克、水1000ml、PH6.5；