[發(fā)明專利]一種基于ZnTCPP@MOF的電化學(xué)免疫檢測(cè)微囊藻毒素的方法

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710413037.0
• 申請(qǐng)日: 2017-06-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107290412B
• 公開(kāi)（公告）日: 2019-09-13
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 鄧盛元;宋宏鑫;姚傳廣;鄭晨昱;崔宏達(dá)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 南京理工大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N27/30
• 分類號(hào): G01N27/30;G01N21/76
• 代理公司: 南京理工大學(xué)專利中心 32203
• 代理人: 劉海霞

本發(fā)明公開(kāi)了一種基于ZnTCPP@MOF的電化學(xué)免疫檢測(cè)微囊藻毒素的方法。所述方法以卟啉功能化的金屬有機(jī)框架物ZnTCPP@MOF對(duì)電極進(jìn)行修飾，并利用四辛基溴化銨增加ZnTCPP@MOF在電極上的穩(wěn)定性，再通過(guò)滴加微囊藻毒素MC?LR抗原及單克隆抗體，組裝形成電化學(xué)免疫傳感器。本發(fā)明方法制得的電化學(xué)免疫傳感器能夠?qū)崿F(xiàn)微囊藻毒素MC?LR的高靈敏性和高特異性檢測(cè)，產(chǎn)生的電致化學(xué)發(fā)光信號(hào)穩(wěn)定，對(duì)微囊藻毒素MC?LR的檢測(cè)下限低，在生物及環(huán)境微囊藻毒素檢測(cè)領(lǐng)域中具有應(yīng)用前景。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于電化學(xué)傳感技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種基于ZnTCPP@MOF的電化學(xué)免疫檢測(cè)微囊藻毒素的方法。

背景技術(shù)

長(zhǎng)期以來(lái)，水體富營(yíng)養(yǎng)化和藍(lán)藻水華現(xiàn)象頻繁發(fā)生，致使水體中微囊藻毒素(MCs)的污染日益嚴(yán)重。微囊藻毒素MC-LR對(duì)水生生物及人類健康具有極大危害作用，世界衛(wèi)生組織在《飲用水衛(wèi)生基準(zhǔn)》(2004版)中規(guī)定了飲用水中MC-LR的安全限值為1.0μg/L，因此飲用水源中MC-LR濃度的監(jiān)測(cè)顯得尤為重要。

張新愛(ài)等人在玻碳電極表面修飾了碳納米管納米金復(fù)合膜，利用MC-LR與抗體之間的特異性識(shí)別作用構(gòu)建“三明治”夾心結(jié)構(gòu)的免疫分析模式，對(duì)MC-LR的線性檢測(cè)范圍為0.50～12.0μg/L，檢測(cè)限為0.30μg/L，但是該方法存在成本較高，線性范圍窄和檢測(cè)限較低的缺點(diǎn)(張新愛(ài)等.碳納米管/納米金復(fù)合膜電化學(xué)免疫傳感器用于微囊藻毒素的檢測(cè)研究[J].分析化學(xué),2014,42.)。張金果等人以辣根過(guò)氧化物酶偶聯(lián)的微囊藻毒素(MCLR-HRP)為標(biāo)記物，基于直接競(jìng)爭(zhēng)的免疫分析模式構(gòu)建了MC-LR電流型免疫傳感器，對(duì)MC-LR的線性檢測(cè)范圍為0.79～12.9μg/L，檢測(cè)限為0.38μg/L，然而該方法操作步驟繁瑣，線性范圍窄，且檢測(cè)限低(張金果等.基于Fe₃O₄@Au磁性納米粒子修飾絲網(wǎng)印刷電極的微囊藻毒素免疫傳感器研究[J].分析化學(xué),2013,41(9):1353-1358.)。因此，設(shè)計(jì)一種簡(jiǎn)單便宜、快速方便，靈敏性更好的MC-LR檢測(cè)方法具有重要意義。

發(fā)明內(nèi)容

針對(duì)現(xiàn)有的微囊藻毒素檢測(cè)方法中存在的成本高、線性范圍窄和檢測(cè)限低的問(wèn)題，本發(fā)明提供了一種簡(jiǎn)單、快速、成本低的基于ZnTCPP@MOF的電化學(xué)免疫檢測(cè)微囊藻毒素的方法。

本發(fā)明的技術(shù)方案為：

一種基于ZnTCPP@MOF的電化學(xué)免疫檢測(cè)微囊藻毒素的方法，具體步驟如下：

步驟1，ZnTCPP@MOF的制備：將均苯三酸和鋅卟啉加入到等體積的無(wú)水乙醇和N,N-二甲基甲酰胺(DMF)的混合溶劑中，攪拌至分散均勻，加入Cu(NO₃)₂·3H₂O溶液，混合均勻后置于60～120℃下進(jìn)行水熱反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，冷卻至常溫，離心，棄去上清液，真空干燥即得到鋅卟啉功能化金屬有機(jī)框架材料ZnTCPP@MOF；

步驟2，傳感器組裝：按鋅卟啉功能化金屬有機(jī)框架物ZnTCPP@MOF和TOAB(四辛基溴化銨)的質(zhì)量比為1:1，將ZnTCPP@MOF和TOAB溶于甲苯中，將混合溶液滴加到潔凈的電極表面，常溫下干燥，滴加摩爾比為4:1的N-羥基琥珀酰亞胺/1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDC/NHS)的水溶液對(duì)框架物進(jìn)行羧基活化，淋洗，滴加待檢測(cè)的微囊藻毒素LR，溫育淋洗后滴加抗微囊藻毒素LR單克隆抗體，進(jìn)行免疫反應(yīng)，溫育淋洗，即組裝得到電化學(xué)免疫傳感器；

步驟3，電致化學(xué)發(fā)光檢測(cè)：以鉑絲電極為對(duì)電極，Ag/AgCl電極為參比電極，步驟2中的電極為工作電極，以含有0.1M KNO₃的0.1M，pH 7.4的PBS為電解液，檢測(cè)ECL信號(hào)強(qiáng)度，根據(jù)微囊藻毒素LR的濃度和ECL信號(hào)的線性關(guān)系，計(jì)算得到待檢測(cè)的微囊藻毒素LR的濃度。