[發(fā)明專利]一種不使用化學(xué)藥品低溫制備胸腺細胞提取物的新技術(shù)

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• 申請?zhí)枺?/td>: 201710411179.3
• 申請日: 2017-05-23
• 公開（公告）號: CN108929367A
• 公開（公告）日: 2018-12-04
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 阿拉阿貝德卡里姆穆罕默德福阿德;馬穎;劉睿娟
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州資生生物科技有限公司
• 主分類號: C07K1/14
• 分類號: C07K1/14;C12N9/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

一種不使用化學(xué)藥品低溫制備胸腺細胞提取物的新技術(shù)，只采用機械或天然的提取方法從胸腺細胞中提取最大數(shù)量酶和多肽，可提取出細胞器內(nèi)部的酶和多肽，且提取的提取物絕無細菌，病毒，真菌或毒素。提取過程嚴格按照最新的GMP標(biāo)準(zhǔn)和補充要求執(zhí)行，忠于患者的安全和療效。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明的技術(shù)領(lǐng)域為生物分子制造產(chǎn)業(yè)。

背景技術(shù)

從活細胞中提取蛋白質(zhì)，不管是從動物來源還是細菌，都是所有的科學(xué)家所面臨的一大挑戰(zhàn)。理論上講，似乎提取蛋白質(zhì)是很簡單的事情，實際上也確實如此。然而，如果保證所提取出的蛋白質(zhì)的數(shù)量和價值依然是一大難點。

簡單來說，將細胞置于低滲溶液中將導(dǎo)致活細胞膨脹，從而導(dǎo)致細胞膜破裂，釋放出細胞質(zhì)及蛋白質(zhì)。

發(fā)明內(nèi)容

目前分離細胞蛋白質(zhì)仍然采用傳統(tǒng)途徑，所有從組織中提取蛋白質(zhì)的方案都含有緩沖液或使細胞溶解的化學(xué)藥品。那些沒有用到化學(xué)藥品的方案很難提取出大量的蛋白質(zhì)。如果樣品為組織樣品而不是采自單獨的或培養(yǎng)細胞就必須用到蛋白酶。某些方案提到使用聲波解降法打破細胞膜和細胞器。聲波解降法看來是個完美的方案，但是組織以及采用樣品的性質(zhì)卻在聲波解降法實施過程中給預(yù)期的完美效果制造了不便。大組織樣品對聲波解降法反應(yīng)不大，且會遺留組織塊殘片。

總的來說，從器官內(nèi)提取蛋白質(zhì)的存在以下五大難點：

1.時間因素

2.器官的性質(zhì)

3.添加的化學(xué)藥品難以清理

4.蛋白質(zhì)的數(shù)量和質(zhì)量

5.蛋白質(zhì)的特定性

時間因素：

這是最主要的一個難點。此時間特指從動物被屠宰到提取最終步驟完成之間的時間。提取多肽的質(zhì)量差異會很大。器官如果立即摘取或-85度冷凍，酶的活性才得以保存而不至被細菌破壞。通常如果摘取不當(dāng)，器官至多存活6小時。6小時時間看來不短，但一旦關(guān)系到組織的處理就顯得很短了。冷凍是保持器官存活以及細胞酶和多肽活性的唯一方案。冷凍或保存在特定溫度限制以下又是另外一大難題，特別是實驗室的管理流程可導(dǎo)致大幅度升溫。

器官的性質(zhì)：

從動物身上摘取器官過程復(fù)雜，需保持器官和重要解剖結(jié)構(gòu)的完整性。例如摘取胸腺就異常復(fù)雜。胸腺是個重要的器官，脆弱且結(jié)構(gòu)不分明。它位于前上縱隔，在心臟前方和胸骨后方。摘取和保存的過程需同步進行。如此復(fù)雜的結(jié)構(gòu)容易在摘取過程中導(dǎo)致大腦的部分活性結(jié)構(gòu)被損壞。同時，摘取過程中胸腺組織的脆弱性也是亟需解決的一大難題。

添加的化學(xué)藥品難以清除：

從細胞中提取蛋白質(zhì)的環(huán)節(jié)必須使用化學(xué)藥品的兩個原因：清除器官上的血液以及切斷細胞間的結(jié)締組織鏈。任何器官內(nèi)都含有一定的血液。不同器官的含血量也各有不同，肝臟，心臟，胸腺中含血量較多，肺和胸腺含血量相對較少。蛋白質(zhì)提取環(huán)節(jié)中無論血液含量多少都需要將它從組織中清除。大多數(shù)常用方案使用化學(xué)試劑作為裂解緩沖液清除紅細胞含量，離心機清除血紅蛋白的含量。無論該方案如何精確，裂解緩沖液在溶液中始終留有殘余。

切斷細胞鏈促使細胞破裂的裂解緩沖液也有同樣的化學(xué)藥品殘留問題。

蛋白質(zhì)的數(shù)量和質(zhì)量：

大多數(shù)人對數(shù)量和質(zhì)量都難以取舍。提取的主要目的就是獲得大量的活性蛋白。那么難題又來了，實驗室過程的本性會讓溶液的溫度升高，從而破壞酶或?qū)е碌鞍踪|(zhì)本性被破壞。因此，所有的操作應(yīng)在低于10度的環(huán)境下進行，否則蛋白質(zhì)的質(zhì)量將大打折扣。

我們的中德合作團隊在研究從胸腺細胞提取蛋白質(zhì)和多肽。以我們的產(chǎn)品“CMDAOE胸腺細胞萃取”為例，研究方向從以下幾個因素出發(fā)：

1.不使用任何化學(xué)藥品。