[發明專利]重組豬瘟E2蛋白及其亞單位疫苗的制備方法和應用在審
| 申請號： | 201710409930.6 | 申請日： | 2017-06-02 |
| 公開（公告）號： | CN107674883A | 公開（公告）日： | 2018-02-09 |
| 發明（設計）人： | 錢泓;吳有強;車影;吳素芳;查銀河 | 申請（專利權）人： | 浙江海隆生物科技有限公司 |
| 主分類號： | C12N15/85 | 分類號： | C12N15/85;C07K14/18;A61K39/187;A61P31/14 |
| 代理公司： | 北京乾誠五洲知識產權代理有限責任公司11042 | 代理人： | 付曉青,李廣文 |
| 地址： | 312000 浙江省紹興市*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 重組 豬瘟 e2 蛋白 及其 單位 疫苗 制備 方法 應用 | ||
1.一種重組豬瘟E2蛋白的制備方法，其特征在于，所述制備方法包括下列步驟：
1)將密碼子優化后的豬瘟E2蛋白編碼基因克隆到真核表達載體中得到含有豬瘟E2蛋白編碼基因的重組質粒；
2)再將含有豬瘟E2蛋白編碼基因的重組質粒轉染至CHO細胞中；
3)通過培養、篩選、馴化2)中所述的CHO細胞株得到高度表達的細胞株；
4)發酵培養3)中所述的細胞株，純化后得到重組豬瘟E2蛋白。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述密碼子優化后的豬瘟E2蛋白編碼基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述真核表達載體為pEE6.4、pEE12.4、pGL4.13、pcDNA3.1。
4.根據權利要求3所述的方法，其特征在于，所述真核表達載體為pEE12.4。
5.根據權利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述CHO細胞株為DG44、DXB11、CHO-K1、CHO-S細胞株。
6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述CHO細胞株為CHO-K1。
7.一種含有重組豬瘟E2蛋白亞單位疫苗的制備方法，其特征在于將根據權利要求1所述的制備方法得到的重組豬瘟E2蛋白與藥學上可接受的佐劑充分混勻，得到豬瘟E2蛋白重組亞單位疫苗。
8.根據權利要求7所述的方法，其特征在于，所述重組亞單位疫苗所用佐劑為ISA 201 VG。
9.根據權利要求7所述的制備方法，其特征在于，所述重組豬瘟E2蛋白與佐劑ISA 201 VG按體積比46:54混合乳化。
10.一種根據權利要求1～7任一所述的重組豬瘟E2蛋白和豬瘟病毒重組亞單位疫苗在制備相關診斷試劑中的應用。
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