[發明專利]ZEB2基因表達變異在胰腺癌化療預后診斷中的應用

有效

• 申請號: 201710403330.9
• 申請日: 2017-06-01
• 公開（公告）號: CN107164480B
• 公開（公告）日: 2018-11-06
• 發明（設計）人: 鄒葉青;黃波;付曉偉;王小中
• 申請（專利權）人: 南昌大學第二附屬醫院
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/113;C12N15/867;A61K31/7105;A61K48/00;A61P35/00
• 代理公司: 寧波市鄞州甬致專利代理事務所(普通合伙) 33228
• 代理人: 李迎春

本發明通過檢測ZEB2基因的表達情況針對胰腺癌治療患者進行預后，具有較好的預測效果，為后期進一步的治療提供初步的指導。同時本發明提供了一種阻斷ZEB2基因表達的siRNA，具有較好的抑制ZEB2基因表達的效果。本發明具有較好的抑制效果以及應用前景。

技術領域

本發明涉及ZEB2基因在制備胰腺癌診斷和/或預后試劑盒中的用途以及ZEB2阻斷劑在制備治療胰腺癌藥物中的用途，屬于醫藥生物技術領域。

背景技術

胰腺癌是一種惡性程度很高，診斷和治療都很困難的消化道惡性腫瘤，約90％為起源于腺管上皮的導管腺癌。其發病率和死亡率近年來明顯上升。5年生存率<1％，是預后最差的惡性腫瘤之一。胰腺癌早期的確診率不高，手術死亡率較高，而治愈率很低。本病發病率男性高于女性，男女之比為1.5～2:1，男性患者遠較絕經前的婦女多見，絕經后婦女的發病率與男性相仿。胰腺癌因其惡性程度高，早期診斷困難，預后差成為腫瘤病學的一大挑戰。盡管目前臨床上將小于2cm的胰腺癌視為早期癌，但此時約有3 0％～4 0％的患者已有淋巴結轉移。因此，僅根據腫瘤大小對胰腺癌分期有其局限性。關于胰腺癌的高危因素與胰腺癌發病間的關系尚有爭議，但對這些人群宜定期B超檢查。出現胰腺癌的警報癥狀，如消瘦、腹瀉、消化不良等應高度疑診胰腺癌。

目前常規的胰腺癌診斷方法包括影像學診斷，比如B超、CT等。腫瘤標志物反映了癌的發生、發展過程及基因激活程度，可在腫瘤宿主的組織、體液及排泄物中檢出。有多種胰腺癌腫瘤標志物已用于臨床，但其敏感性、特異性尚不理想。常見的標志物癌胚抗原(CEA)：在胰腺癌患者血清中有較高的表達率，但其特異性低，其增高也見于肝、結直腸、胃、膽囊癌及非消化道癌。因而限制了其應用價值。另外一個標志物CA19-9：是目前公認的胰腺癌相關腫瘤標志物，常作為標準標志物來判斷其他腫瘤標志物對胰腺癌診斷的實用價值，目前巳廣泛用于臨床。CA19-9診斷胰腺癌的敏感性為69％～93％，特異性為81％～85％。對高危患者可用CA19-9作為篩選檢查，其結果優于CEA。除膽管癌外，與其他消化道惡性腫瘤均有良好的鑒別診斷意義，而且對早期胰腺癌的診斷亦有一定價值，但是診斷效果還有改進的空間。

ZEB2基因在現有技術中分別與其它的小分子一起在乳腺癌、膀胱癌、子宮內膜癌、宮頸癌和鼻咽癌中均有一定的指示作用，但是在胰腺癌中還沒有相關報道。特別是在胰腺癌化療預后診斷中的應用還沒有涉及。

發明內容

ZEB2基因表達水平預測胰腺癌患者預后的標志物用途，基于ZEB2基因表達水平可以預測胰腺癌患者的預后，ZEB2表達水平低的患者預后好，表達水平高的患者預后差。

基于ZEB2基因表達水平預測胰腺癌患者預后的檢測及應用方法，a.提取腫瘤患者原發癌組織標本的細胞總RNA；以RNA為模板逆轉錄合成cDNA；以cDNA為模板，用ZEB2基因和管家基因的特異性引物和熒光標記探針進行實時定量PCR擴增，計算ZEB2基因mRNA的相對表達量；b.根據胰腺癌患者復發轉移陽性病例和復發轉移陰性病例的ZEB2mRNA表達量，確定預后判斷的臨界值。

ZEB2mRNA表達量低于臨界值的患者預后好，而高于臨界值的患者預后差。

所述的檢測方法，以原發癌組織中ZEB2mRNA表達量對腫瘤患者預后判斷，表達量低的患者則判斷為預后好，表達量低高的則判斷為預后差。

本發明通過研宄證實ZEB2可應用于診斷胰腺癌治療效果的指標預測預后；ZEB2可作為胰腺癌治療新藥和生物免疫治療的新靶點。阻斷ZEB2表達可抑制胰腺腫瘤生長，抑制胰腺腫瘤細胞，可作為胰腺癌治療新藥和生物免疫治療的新靶點。

另外，本發明提供一種特異性抑制ZEB2基因表達的siRNA，其序列如SEQ ID NO：1和2所示。

另外，本發明提供一種基因干擾慢病毒載體，為將編碼特異性抑制ZEB2基因表達的干擾小分子RNA的基因片段克隆入慢病毒載體后獲得，能產生人ZEB2基因小分子干擾RNA。