[發(fā)明專利]一種用于抑制生產(chǎn)用干細(xì)胞分化的技術(shù)方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710402998.1
• 申請(qǐng)日: 2017-05-31
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108977463A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-12-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 張炬;吳金蕓
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 伯仕利生物科技發(fā)展(鹽城)有限公司
• 主分類號(hào): C12N15/85
• 分類號(hào): C12N15/85;C12N15/19;C12N5/10;A61Q19/00;A61Q19/08;A61P17/02;A61P17/18
• 代理公司: 北京超凡志成知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11371
• 代理人: 王闖

本發(fā)明涉及一種利用常規(guī)分離獲得的干細(xì)胞，經(jīng)分子克隆技術(shù)“過(guò)表達(dá)”能抑制干細(xì)胞分化，從而達(dá)到長(zhǎng)期維持該類干細(xì)胞生長(zhǎng)特性和分泌細(xì)胞因子特性的方法。用該方法建立的細(xì)胞株將能長(zhǎng)期穩(wěn)定的生長(zhǎng)繁殖和分泌各種細(xì)胞因子。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及利用克隆技術(shù)“過(guò)表達(dá)”抑制干細(xì)胞分化。

背景技術(shù)

干細(xì)胞具有獨(dú)特的分化潛能，能治愈組織難以自愈的創(chuàng)傷，能治療臨床上難以治愈的疾病，甚至可以使人返老還童、讓青春永駐時(shí)，人們便開(kāi)始企盼著于細(xì)胞時(shí)代的到來(lái)。

干細(xì)胞是一種具有自我復(fù)制功能和多分化潛能的早期未分化細(xì)胞，醫(yī)學(xué)界稱之為“萬(wàn)用細(xì)胞”。按照干細(xì)胞的分化潛能，分化層次及其所具有的功能，大致可分為三種類型：胚胎干細(xì)胞、組織干細(xì)胞和專能干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞又稱全能干細(xì)胞，是從哺乳動(dòng)物包括人的早期胚胎分離培養(yǎng)出來(lái)的。其分化潛能大、增殖能力強(qiáng)，既是胚胎發(fā)育的基礎(chǔ)，又是機(jī)體各種細(xì)胞最早的祖先，由它可形成完整的生物個(gè)體，如早期的卵裂球細(xì)胞、胚泡中的內(nèi)細(xì)胞群中的細(xì)胞、早期生殖嵴的胚芽細(xì)胞等。從某種意義上說(shuō)受精卵也可視為特殊的全能干細(xì)胞。胚胎干細(xì)胞在進(jìn)一步的分化中，可形成各種組織干細(xì)胞，又稱多能干細(xì)胞，它具有分化出多種細(xì)胞組織的潛能，但不能發(fā)育成完整的個(gè)體，如多能造血干細(xì)胞、神經(jīng)干細(xì)胞、表皮干細(xì)胞等均屬于此類。這些多能干細(xì)胞在一定條件下可分化成定向發(fā)育的、多系列的專能干細(xì)胞。專能干細(xì)胞只能分化成某一類型的細(xì)胞.專能干細(xì)胞的分裂是不對(duì)稱性的，即在其所形成的2個(gè)子代細(xì)胞中，1個(gè)仍保留原來(lái)干細(xì)胞的全部特征，以維持機(jī)體內(nèi)干細(xì)胞在數(shù)量上和質(zhì)量上的穩(wěn)定；而另一子細(xì)胞卻開(kāi)始分化，發(fā)育，最終形成新的具有特定形態(tài)和功能的體細(xì)胞，以對(duì)正常相應(yīng)組織細(xì)胞加以補(bǔ)充，維持細(xì)胞器官生長(zhǎng)與衰亡之間的動(dòng)態(tài)平衡。由于全能干細(xì)胞分化發(fā)育成體細(xì)胞的過(guò)程，是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，也是細(xì)胞數(shù)量上由少到多，功能上由幼稚到成熟的增殖、放大的過(guò)程。

干細(xì)胞的生物學(xué)特性

干細(xì)胞具有多種生物學(xué)特性，最主要的是具有自我更新和多向分化潛能及無(wú)限增殖能力。

干細(xì)胞還具有分泌多種細(xì)胞因子的能力，人表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、人角質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)因子(KGF)、人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子(FGF)、人血小板樣衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)、纖維連接蛋白(FN)等。該細(xì)胞培養(yǎng)上清已被用于美容產(chǎn)品等的開(kāi)發(fā)。各種細(xì)胞因子的生理學(xué)功能如下：

一、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子-EGF的生理功能

1.研究發(fā)現(xiàn)，EGF能促進(jìn)上皮細(xì)胞、成纖維細(xì)胞的增殖；

2.增強(qiáng)表皮細(xì)胞的活力；

3.延緩表皮細(xì)胞的老化，使肌膚各組成成份保持最佳生理狀態(tài)；

4..刺激細(xì)胞外一些大分子(如透明質(zhì)酸和膠原白等)的合成與分泌、滋潤(rùn)皮膚，是決定肌膚活力和健康的源泉。

二、人血小板樣衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)的生理功能

1.血小板衍生生長(zhǎng)因子PDGF是祛皺抗衰的新秀，作用于真皮層的成纖維母細(xì)胞法，達(dá)到很好抗衰除皺效果。其作為祛皺抗衰成分在國(guó)外早已使用，如美國(guó)Reluma蘊(yùn)涵豐富PDGF等生長(zhǎng)因子成分的眼霜和潤(rùn)膚霜產(chǎn)品已成功上市，并取得消費(fèi)者的一致好評(píng)。

2.誘導(dǎo)受損的上皮細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞分裂增殖；

3.促進(jìn)血管的形成與再生，為創(chuàng)傷修復(fù)提供保證。對(duì)于延緩衰老有明顯療效；

4.能刺激血管平滑肌細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、膠質(zhì)細(xì)胞的分裂增生；

5.能夠促進(jìn)肌纖維母細(xì)胞產(chǎn)生膠原，尤其是I型及Ⅲ型膠原；

6.促進(jìn)皮膚細(xì)胞的生長(zhǎng)與更新，提升皮膚組織的生理活性與新陳代謝水平，增強(qiáng)皮膚細(xì)胞的免疫力與自我修復(fù)能力，修復(fù)由于日光、嚴(yán)寒、化學(xué)物質(zhì)與機(jī)械磨損傷害造成的紅血絲與敏感肌膚，使皮膚細(xì)胞更加白皙潤(rùn)澤，鮮活飽滿，讓面部色斑暗沉，枯黃干燥的衰老面貌煥然一新。