[發明專利]一種DNA折紙生物色譜柱的制備方法及其在藥物篩選中的應用

有效

• 申請號: 201710401978.2
• 申請日: 2017-06-01
• 公開（公告）號: CN107233750B
• 公開（公告）日: 2019-03-29
• 發明（設計）人: 周婕;陳秀英;孫芳;孟令償;孫沖;葉衛冉
• 申請（專利權）人: 鄭州大學
• 主分類號: B01D15/20
• 分類號: B01D15/20;G01N30/02
• 代理公司: 鄭州天陽專利事務所(普通合伙) 41113
• 代理人: 聶孟民

1.一種DNA折紙生物色譜柱的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：

（1）、活化硅膠及制備羧基化硅膠：

將硅膠置于體積濃度為20%的鹽酸中回流5-7 h，再用水洗至中性，在真空干燥箱中，于55-65℃下真空干燥12-18 h，成活化硅膠，將活化硅膠置于無水甲苯中，加入γ-氨丙基三乙氧基硅烷中，氮氣保護下，100-120℃回流22-26 h，用甲苯及乙醚分別洗滌3次，于真空干燥箱中55-65℃干燥12-18 h，成氨基化硅膠，將氨基化硅膠超聲分散于30 mL四氫呋喃中，加入與γ-氨丙基三乙氧基硅烷等摩爾比的丁二酸酐，室溫攪拌24 h，用無水乙醇洗滌3~5次，于真空干燥箱中55-65℃干燥12-18 h，成羧基化硅膠，所說的硅膠粒徑：5 μm，孔徑：100-300 ?；

（2）、DNA折紙組裝靶點：

將靶點用長度為10~30 bp的單鏈DNA修飾，即靶點化合物含有一段游離的DNA鏈，訂書釘鏈有216條，其中12條訂書釘鏈的5′端用一段游離的單鏈DNA修飾，與靶點化合物上的修飾DNA鏈互補，3~5條訂書釘鏈的5′端用氨基修飾，將M13mp18 ssDNA、216條訂書釘鏈、靶點化合物按1:(5-10):1的摩爾比投料于PCR儀中，通過退火以6 ℃/min的速率從60℃降到35℃，即得到組裝有靶點化合物的氨基化的DNA折紙納米結構，所述的靶點為蛋白質、生物酶、膜受體、核受體及其他靶點化合物；

（3）、組裝靶點的DNA折紙鍵合羧基化硅膠：

將步驟1制備的羧基化硅膠超聲分散于pH值為7.2-7.4的PBS溶液中，加入6 mg DCC與5mg NHS混勻，再加入組裝了靶點化合物的氨基化的DNA折紙4 mg，于室溫下攪拌22-26 h，用pH值為7.2-7.4的PBS溶液及超純水分別洗滌3次，于真空干燥箱中55-65℃干燥12-18 h，得DNA折紙生物色譜介質；

（4）、裝柱制成DNA折紙生物色譜柱：

取不銹鋼液相色譜柱，在10~20 MPa下，將步驟3制備的DNA折紙生物色譜介質進行裝柱，裝柱用的勻漿液和頂替液均為pH值為7.2-7.4的PBS緩沖液，即得到DNA折紙生物色譜柱，所述的不銹鋼液相色譜柱內腔直徑為4.6 mm，長為150 mm。

2.根據權利要求1所述的DNA折紙生物色譜柱的制備方法，其特征在于，由以下步驟實現：

（1）、活化硅膠及制備羧基化硅膠：

將硅膠置于體積濃度為20%的鹽酸中回流6 h，再用水洗至中性，在真空干燥箱中，于60℃下真空干燥15 h，成活化硅膠，將活化硅膠置于無水甲苯中，加入γ-氨丙基三乙氧基硅烷中，氮氣保護下，110℃回流24 h，用甲苯及乙醚分別洗滌3次，于真空干燥箱中60℃干燥15 h，成氨基化硅膠，將氨基化硅膠超聲分散于30 mL四氫呋喃中，加入與γ-氨丙基三乙氧基硅烷等摩爾比的丁二酸酐，室溫攪拌24 h，用無水乙醇洗滌3~5次，于真空干燥箱中60℃干燥15 h，成羧基化硅膠；

（2）、DNA折紙組裝靶點：

將靶點用長度為10~30 bp的單鏈DNA修飾，即靶點化合物含有一段游離的DNA鏈，訂書釘鏈有216條，其中12條訂書釘鏈的5′端用一段游離的單鏈DNA修飾，與靶點化合物上的修飾DNA鏈互補，3~5條訂書釘鏈的5′端用氨基修飾，將M13mp18 ssDNA、216條訂書釘鏈、靶點化合物按1:(5-10):1的摩爾比投料于PCR儀中，通過退火以6 ℃/min的速率從60℃降到35℃，即得到組裝有靶點化合物的氨基化的DNA折紙納米結構；

（3）、組裝靶點的DNA折紙鍵合羧基化硅膠：

將步驟1制備的羧基化硅膠超聲分散于pH值為7.2-7.4的PBS溶液中，加入6 mg DCC與5mg NHS混勻，再加入組裝了靶點化合物的氨基化的DNA折紙4 mg，于室溫下攪拌24 h，用pH值為7.2-7.4的PBS溶液及超純水分別洗滌3次，于真空干燥箱中60℃干燥15 h，得DNA折紙生物色譜介質；

（4）、裝柱制成DNA折紙生物色譜柱：

取不銹鋼液相色譜柱，在10~20 MPa下，將步驟3制備的DNA折紙生物色譜介質進行裝柱，裝柱用的勻漿液和頂替液均為pH值為7.2-7.4的PBS緩沖液，即得到DNA折紙生物色譜柱，所述的不銹鋼液相色譜柱內腔直徑為4.6 mm，長為150 mm。