[發(fā)明專利]一種鹽生草葉片分生組織高效再生體系建立的方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710395693.2
• 申請日: 2017-05-31
• 公開（公告）號: CN107027630B
• 公開（公告）日: 2019-03-01
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 孟亞雄;王化俊;姚立蓉;汪軍成;任盼榮;李葆春;馬小樂;楊軻;賴勇;司二靜;閆棟;周振國;張燕
• 申請（專利權(quán)）人: 甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 廈門智慧呈睿知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 35222
• 代理人: 郭福利

1.一種鹽生草葉片分生組織高效再生體系建立的方法，其特征在于步驟為：

（1）鹽生草無菌葉片分生組織的獲得：常規(guī)滅菌后的鹽生草種子進(jìn)行無菌培養(yǎng)15-20d，取無菌苗的葉片分生組織作為誘導(dǎo)愈傷的外植體；

（2）愈傷組織的誘導(dǎo)：將步驟（1）獲得的無菌外植體接種于誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基，培養(yǎng)15-20d，誘導(dǎo)愈傷組織的發(fā)生；其中，誘導(dǎo)愈傷組織的培養(yǎng)基由MS基本培養(yǎng)基，2.0-2.5mg/L 2,4-二氯苯氧乙酸（2，4-D），0.5-1g/L Polyvinyl pyrrolidone (PVP)，10-15mg/L 谷氨酰胺，5-6g/L瓊脂，20-30g/L蔗糖組成，pH=5.8-6.0；（3）愈傷組織的繼代培養(yǎng)：將步驟（2）獲得的嫩綠色愈傷組織轉(zhuǎn)接至繼代培養(yǎng)基，培養(yǎng)15-20d，使其增殖；其中，繼代培養(yǎng)基由MS基本培養(yǎng)基，0.5-1 mg/L 2，4-D，0.5-1g/L Polyvinyl pyrrolidone (PVP)，10-15mg/L 谷氨酰胺，5-6g/L瓊脂，20-30g/L蔗糖組成，pH=5.8-6.0；（4）愈傷組織的分化及再生培養(yǎng)：將步驟（3）獲得的深綠色愈傷組織切割成直徑0.3-0.5cm的小塊，轉(zhuǎn)接至分化培養(yǎng)基，培養(yǎng)20-25d，產(chǎn)生不定芽，然后將不定芽轉(zhuǎn)接至相同的分化培養(yǎng)基連續(xù)培養(yǎng)1-2次，至生成叢生芽；其中，分化培養(yǎng)基由MS基本培養(yǎng)基，0.5-1 mg/L 6-BA，1.5-2 mg/L KT，0.15-0.25mg/L NAA，2-2.5g/L酪蛋白，0.5-1g/L Polyvinyl pyrrolidone (PVP)，10-15mg/L 谷氨酰胺，5-6g/L瓊脂，20-30g/L蔗糖組成，pH=5.8-6.0；（5）叢生芽的生根培養(yǎng)：將步驟（4）獲得的叢生芽轉(zhuǎn)接至生根培養(yǎng)基，培養(yǎng)25-30d，最終獲得生長良好的再生植株，其中，生根培養(yǎng)基由MS基本培養(yǎng)基，4-5g/L瓊脂，20-30g/L蔗糖組成，pH=5.8-6.0。

2.如權(quán)利要求1所述的鹽生草葉片分生組織高效再生體系建立的方法，其特征在于步驟（1）所述的葉片分生組織為無菌苗第5和6片葉生成時(shí)的葉片分生組織。

3.如權(quán)利要求1所述的鹽生草葉片分生組織高效再生體系建立的方法，其特征在于所述的步驟（1）、（2）、（3）、（4）、（5）均在連續(xù)光照培養(yǎng)、光照強(qiáng)度在1500-2000 lx之間、濕度60-70%的環(huán)境下進(jìn)行。