[發(fā)明專利]檢測類鼻疽伯克霍爾德菌的引物、試劑盒

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710392521.X
• 申請日: 2017-05-27
• 公開（公告）號: CN106995855B
• 公開（公告）日: 2020-04-14
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 郭旭光;文金洲;夏勇
• 申請（專利權(quán)）人: 廣州醫(yī)科大學(xué)附屬第三醫(yī)院
• 主分類號: C12Q1/689
• 分類號: C12Q1/689;C12Q1/6844;C12Q1/04;C12N15/11;C12R1/01
• 代理公司: 廣州華進(jìn)聯(lián)合專利商標(biāo)代理有限公司 44224
• 代理人: 曾銀鳳;萬志香

本發(fā)明公開了檢測類鼻疽伯克霍爾德菌的試劑盒，該試劑盒包括有序列組成為SEQ ID.NO.1?SEQ ID.NO.2的外引物，序列組成為SEQ ID.NO.3?SEQ ID.NO.4的內(nèi)引物。本發(fā)明所述試劑盒檢測類鼻疽伯克霍爾德菌具有靈敏度高，特異性強，且檢測快速的優(yōu)點。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)，具體是涉及一種檢測類鼻疽伯克霍爾德菌的引物、試劑盒。

背景技術(shù)

類鼻疽是一種由類鼻疽伯克霍爾德菌(Burkholderia pseudomallei)所致的地方性人獸共患傳染病。類鼻疽致死率高，臨床表現(xiàn)多樣且缺乏特異性，容易被誤診為肺炎、肺結(jié)核、肺膿腫或其他化膿菌所致的敗血癥，又俗稱“似百樣病”。快速診斷類鼻疽伯克霍爾德菌感染是治療和預(yù)防類鼻疽病的關(guān)鍵。雖然傳統(tǒng)的培養(yǎng)法方法是診斷類鼻疽的標(biāo)準(zhǔn)方法，但是需要一定的培養(yǎng)和鑒定時間，容易錯過最佳治療時機，且準(zhǔn)確率還有待提高。

因此，找到一種簡單、快速、經(jīng)濟(jì)的類鼻疽伯克霍爾德檢測方法，成為當(dāng)前的研究熱點之一。隨著人們對于分子生物學(xué)的不斷深入研究，一種全新的核酸擴(kuò)增技術(shù)－環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)越來越受到研究人員的關(guān)注，其檢測靈敏度遠(yuǎn)高于PCR方法、耗時也顯著減少。因此，本研究擬建立BP的Real－LAMP檢測方法，將實時熒光的敏感性和LAMP的快速性有機的結(jié)合，探討其在臨床應(yīng)用中的可行性，為臨床提供一種簡單、快速的BP的檢測方法。

如何將環(huán)介導(dǎo)等溫擴(kuò)增技術(shù)(LAMP)很好地應(yīng)用到類鼻疽伯克霍爾德菌檢測上，從而建立了一種快速、準(zhǔn)確、價廉、操作簡單的檢測類鼻疽伯克霍爾德菌的熒光定量LAMP方法以該法對臨床常見病原菌和類鼻疽伯克霍爾德菌臨床分離株進(jìn)行檢測，應(yīng)用于臨床上類鼻疽伯克霍爾德菌的定性檢測，以期為該菌的臨床診斷和流行病學(xué)調(diào)查提供可靠方法，目前還沒有具體的報道，有待于研發(fā)人員的大力研究。

為檢測類鼻疽伯克霍爾德提供新的檢測技術(shù)，我們試行運用Real-time LAMP技術(shù)檢測類鼻疽伯克霍爾德菌，尋找高特異性的檢測類鼻疽伯克霍爾德的Real-time LAMP試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的目的之一是提供一種檢測類鼻疽伯克霍爾德菌的試劑盒，該試劑盒具有靈敏度高、特異性強的優(yōu)點。

實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下。

一種檢測類鼻疽伯克霍爾德菌的試劑盒，包括有序列組成為SEQID.NO.1-SEQID.NO.2的外引物，序列組成為SEQID.NO.3-SEQID.NO.4的內(nèi)引物。

在其中一個實施例中，還包括有序列組成為SEQID.NO.5-SEQID.NO.6的環(huán)引物。

在其中一個實施例中，在檢測時，所述內(nèi)引物、外引物、環(huán)引物的濃度比為8：1：4。

在其中一個實施例中，所述內(nèi)引物、外引物、環(huán)引物的濃度分別為1.6、0.2、0.8μmol/L。

本發(fā)明的另一個目的是提供一種檢測類鼻疽伯克霍爾德菌的引物。

實現(xiàn)上述目的的技術(shù)方案如下。

一種檢測類鼻疽伯克霍爾德菌的引物，包括有序列組成為SEQID.NO.1-SEQID.NO.2的外引物，序列組成為SEQID.NO.3-SEQID.NO.4的內(nèi)引物。

在其中一個實施例中，還包括有序列組成為SEQID.NO.5-SEQID.NO.6的環(huán)引物。

本發(fā)明具有以下有益效果：