[發(fā)明專利]一種羊多抗血清特異性抗體的純化方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201710391678.0
• 申請日: 2017-05-27
• 公開（公告）號: CN107163141A
• 公開（公告）日: 2017-09-15
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 袁金城;王耀;莫愛娟
• 申請（專利權(quán)）人: 海奧斯生物科技鎮(zhèn)江有限公司
• 主分類號: C07K16/06
• 分類號: C07K16/06;C07K1/16;C07K1/30;C07K1/34
• 代理公司: 南京申云知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙)32274
• 代理人: 王云

1.一種羊多抗血清特異性抗體的純化方法，其特征在于，該方法包括以下步驟：

1）鹽析法：用辛酸、硫酸銨三步沉淀法，將羊多抗血清中的特異性抗體全部提取；

2）蛋白G柱純化：取鹽析后的羊多抗血清特異性抗體，用結(jié)合緩沖液稀釋，過濾，加入G柱中，收集流穿液，用結(jié)合緩沖液加入G柱中，待全部流出，加洗脫緩沖液，同時收集洗脫液；即得到純化后的羊多抗血清特異性抗體。

2.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的羊多抗血清特異性抗體的純化方法，其特征在于，步驟1）鹽析法的具體步驟如下；

（11）羊多抗血清用4倍體積乙酸-乙酸鈉緩沖液稀釋，用0.1M NaOH 調(diào)至pH4.5；

（12）室溫下滴加辛酸，攪拌30min，按每升溶液滴加25mL辛酸的比例滴加；

（13）冷凍高速離心機(jī)離心，收集上清夜，棄去沉淀；

（14）過濾上清液；

（15）按上清液體積的l/10加入10×PBS，用5M NaOH 調(diào)至pH7.4；

（16）按每升溶液加277g 硫酸銨，攪拌30min；

（17）冷凍高速離心機(jī)離心，棄去上清液，收集沉淀；

（18）沉淀用透析液溶解，透析脫鹽。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的羊多抗血清特異性抗體的純化方法，其特征在于，步驟（13）中的離心轉(zhuǎn)速為10000rpm，離心30min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的羊多抗血清特異性抗體的純化方法，其特征在于，步驟（17）中的離心轉(zhuǎn)速為5000rpm，離心15min。

5.根據(jù)權(quán)利要求1 所述的羊多抗血清特異性抗體的純化方法，其特征在于，步驟2）中，蛋白G柱純化法的步驟為：

（21）血清處理：取羊多抗血清，用結(jié)合緩沖液 1:1稀釋，充分混勻，濾膜過濾；

（22）柱子平衡：用結(jié)合緩沖液加入柱中，流至液面與膠面平；

（23）吸附：處理好的抗血清加入柱中，收集流穿液；

（24）洗雜：用結(jié)合緩沖液加入柱中，待全部流出；

（25）洗脫抗體：加洗脫緩沖液 ，同時用離心管收集洗脫液，前1.5ml丟棄，收集后續(xù)全部洗脫液。

6.根據(jù)權(quán)利要求1 或5所述的羊多抗血清特異性抗體的純化方法，其特征在于，步驟2）中，結(jié)合緩沖液為： 10mMPBS含NaN₃ 0.01% ，pH7.2—7.4。

7.根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的羊多抗血清特異性抗體的純化方法，其特征在于，步驟(2)中，洗脫緩沖液為：10 mM NaH₂PO₄ ，150mM NaCl 含NaN₃ 0.01% （重量百分比），用鹽酸調(diào)至pH 2.8±0.04，其中所用鹽酸為 5M HCl。

8.根據(jù)權(quán)利要求1 或5所述的羊多抗血清特異性抗體的純化方法，其特征在于，步驟2）中，過濾采用0.22nm的濾膜過濾。