[發明專利]一種基于OCTS技術的胰腺癌、惡性間皮瘤CAR-T治療載體及其構建方法和應用

有效

• 申請號: 201710390649.2
• 申請日: 2017-05-27
• 公開（公告）號: CN107299110B
• 公開（公告）日: 2019-11-22
• 發明（設計）人: 祁偉;俞磊;康立清;林高武;余宙
• 申請（專利權）人: 上海優卡迪生物醫藥科技有限公司
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/62;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 31325 上海市匯業律師事務所
• 代理人: 王函<國際申請>=<國際公布>=<進入國

本發明公開了一種基于OCTS技術的胰腺癌、惡性間皮瘤CAR?T治療載體，包括慢病毒骨架質粒、人EF1α啟動子(SEQ ID NO.14)、OCTS嵌合受體結構域和PDL1單鏈抗體；OCTS嵌合受體結構域包括：CD8 leader嵌合受體信號肽(SEQ ID NO.15)、PDL1單鏈抗體輕鏈VL(SEQ ID NO.16)、PDL1單鏈抗體重鏈VH(SEQ ID NO.17)、MESOTHELIN單鏈抗體輕鏈VL(SEQ ID NO.18)、MESOTHELIN單鏈抗體重鏈VH(SEQ ID NO.19)、抗體內鉸鏈Inner?Linker(SEQ ID NO.20)、單鏈抗體間鉸鏈Inter?Linker(SEQ ID NO.21)、CD8 Hinge嵌合受體鉸鏈(SEQ ID NO.22)、CD8Transmembrane嵌合受體跨膜區(SEQ ID NO.23)、TCR嵌合受體T細胞激活域(SEQ ID NO.26)以及嵌合受體共刺激因子區域。此外，本發明還公開了該載體的構建方法及其在制備治療胰腺癌、惡性間皮瘤的藥物中的應用。

技術領域

本發明屬于醫學生物領域，具體涉及一種載體，尤其涉及一種基于OCTS技術的胰腺癌、惡性間皮瘤 CAR-T治療載體。此外，本發明還涉及該載體的構建方法和應用。

背景技術

腫瘤免疫治療的理論基礎是免疫系統具有識別腫瘤相關抗原、調控機體攻擊腫瘤細胞(高度特異性的 細胞溶解)的能力。1950年代，Burnet和Thomas提出了“免疫監視”理論，認為機體中經常會出現的突變 的腫瘤細胞可被免疫系統所識別而清除，為腫瘤免疫治療奠定了理論基礎[Burnet FM.Immunological aspects of malignant disease.Lancet,1967；1:1171-4]。隨后，各種腫瘤免疫療法包括細胞因子療法、 單克隆抗體療法、過繼免疫療法、疫苗療法等相繼應用于臨床。

2013年一種更先進的腫瘤免疫療法---CAR-T療法成功用于臨床，并表現了前所未有的臨床療效。 CAR-T，全稱是Chimeric Antigen Receptor T-Cell Immunotherapy，嵌合抗原受體T細胞免疫療法。該療 法是通過轉基因的手段，將啟動子、抗原識別區、共刺激因子、效應區等共同組成的嵌合分子，導入T細 胞基因組內，從而使T細胞對靶細胞的識別、信號轉導、殺傷等功能融為一體，實現了對靶細胞的特異性 殺傷[Eleanor J.Cheadle,etal.CAR T cells:driving the road from the laboratory to the clinic.Immunological Reviews 2014.Vol.257:91–106]。CAR-T療法在臨床上最領先的有諾華的CLT019，采用 CLT019治療復發難治急性淋巴細胞白血病患者，六個月的腫瘤無進展生存率達到67％，其中最長的應答時 間達到兩年多。總部位于中國上海的上海優卡迪生物醫藥科技有限公司與醫院合作，截止到2017年2月， 共治療復發難治急性淋巴細胞白血病患者36例，其中完全24例，緩解比例達到66.6％。這是抗癌研究的顛 覆性突破。CAR-T細胞療法可能是最有可能治愈癌癥的手段之一，并被《Science》雜志評為2013年度十大 科技突破之首。

CAR-T目前在治療B-淋巴細胞白血病等幾種類型的血液腫瘤方面療效顯著，但是也存在一些局限性， 目前一個嵌合抗原受體只能識別一種抗原靶標，腫瘤細胞是個復雜的群體，含有相應抗原的腫瘤細胞被清 除以后，不含相應抗原的腫瘤細胞會迅速增殖，一段時間后導致腫瘤復發。那么要使CAR-T識別能同時識 別兩種抗原，就有兩個方案可選：一是將兩組嵌合抗原受體構建進入一個慢病毒轉基因載體，一次性將兩 組嵌合抗原受體轉導進入原代T淋巴細胞；二是用兩個慢病毒轉基因載體分兩次轉導，將兩組嵌合抗原受 體分別轉導進入原代T淋巴細胞。

方案一的缺點在于占用慢病毒轉基因載體的寶貴容量，不利于裝載其它功能元件；轉基因載體包裝效 率低；基因轉導效率非常低，很難轉導進入原代T淋巴細胞內。