[發明專利]pHRE?Egr1?HSV?TK/PEI?PtFe?NPs復合物及其制備方法

在審

• 申請號: 201710389528.6
• 申請日: 2017-05-27
• 公開（公告）號: CN107184992A
• 公開（公告）日: 2017-09-22
• 發明（設計）人: 林梅;肖艷紅;姜興茂;施裕娟
• 申請（專利權）人: 泰州市人民醫院
• 主分類號: A61K48/00
• 分類號: A61K48/00;A61K47/59;A61K47/69;A61K51/06;A61K51/12;A61K41/00;A61K9/00;C12N15/85;A61K101/02
• 代理公司: 南京知識律師事務所32207
• 代理人: 盧亞麗

技術領域

本發明屬于醫學及基因工程技術領域，具體涉及一種pHRE-Egr1-HSV-TK/PEI-PtFe-NPs復合物及其制備方法和應用。

背景技術

肝癌是臨床上最常見的惡性腫瘤之一，也是腫瘤相關性死亡的第三大主要原因，具有高發性和高致死性，全世界每年約有60萬人死于肝癌。手術治療、經導管動脈化療栓塞(TACE)、射頻消融(RFA)、肝移植、放射治療和化療是目前臨床上治療肝癌的常用方法。在過去數十年中，盡管在肝癌的檢測和治療方面已經取得了許多進展，但肝癌發病隱匿，病人被確診時多數已處于中晚期，其惡性程度高，預后不良，極易復發和發生轉移，5年生存率不足30％。因此尋求肝癌治療的新方法，特別是對中晚期、轉移或復發的肝癌具有重要的臨床意義。

近年來，腫瘤干細胞理論的提出引起了國內外學者的廣泛關注。該理論認為，腫瘤干細胞(cancer stem cells，CSC)是存在于腫瘤組織中的一小部分細胞(約5％左右)，這些細胞具有自我更新、無限增殖能力和多向分化的潛能，是導致腫瘤異質性的根源之一，它們大多處于G0期和缺氧微環境中，并且對放療、化療有一定的抵抗性，在腫瘤的發生、發展、復發及轉移過程中起到關鍵性作用。目前已經在血液惡性腫瘤和乳腺癌，結直腸癌，肝癌，肺癌，胰腺癌和多發性骨髓瘤等實體腫瘤中發現了腫瘤干細胞。根據腫瘤干細胞理論，徹底消滅肝癌干細胞(liver cancer stem cells，LCSCs)是治愈肝癌和改善預后的關鍵，可將其作為監測肝癌發展和評估療效的重要指標。目前臨床上用于分離肝癌干細胞的方法主要有流式細胞分選法和免疫磁珠分選法，其原理都是通過識別各種細胞特異性標記物分選出肝癌干細胞。大量的LCSC表面標記已經被發現和證實，例如ALDH，CD133，CD13，CD90，CD44，CD24，OV6和EpCAM等。CD133是一種五次跨膜單鏈糖蛋白，可以作為胃癌，肺癌，肝癌，結腸癌以及胰腺癌等許多腫瘤的干細胞表面標志物。根據研究發現，CD133⁺肝癌細胞具有增殖、分化和自我更新的能力。Suetsugu等發現，從具有干細胞樣特性或癌祖細胞特性的人肝細胞癌細胞系中可以分離出CD133⁺細胞，CD133⁺Huh-7細胞比CD133^-Huh-7細胞具有更強的體外增殖能力。因此，聯合多種方法靶向治療肝癌干細胞是肝癌治療領域重要的研究方向。

隨著熱生物學和熱物理學的不斷發展和創新，腫瘤熱療近年來有了極快的發展，腫瘤熱療的方法和技術得到不斷改進和應用。Jordan等將納米技術和磁感應熱療相結合，研制出了磁流體熱療(Magnetic Fluid Hyperthermia，MFH)方法來治療腫瘤，已取得了顯著的效果。磁流體熱療就是通過一定的方法將磁流體送達腫瘤區域，在交變磁場中，磁性顆粒可通過松弛磁矢量在磁場中的重排機制升溫，達到能殺死腫瘤細胞的溫度，而周圍正常組織中不存在磁流體，升溫不明顯或未升溫，使該種療法具有高度的靶向性及特異性。輻射-基因治療是一種全新的腫瘤治療方法，它把治療基因與具有輻射誘導性的調控序列相藕連，形成重組質粒后轉入瘤體內，在對腫瘤實施局部輻射時誘導基因表達，實現基因和射線對腫瘤的雙重殺傷。這一治療方法可以相對降低等效照射劑量，減輕正常組織的損傷，還可以通過射線的局部照射來實現治療基因的定位表達。但基因治療要獲得理想的療效必須解決兩個關鍵性問題，一個是基因轉移載體問題，另一個是基因表達的可調控性問題。

近年來，放射免疫療法(Radio Immunotherapy,RIT)在治療腫瘤方面取得了突破進展。該種療法是利用放射性抗原與特異性抗體相結合的原理，將針對腫瘤相關抗原的特異性抗體作為核素載體，用放射性核素對其進行標記，注入體內與腫瘤細胞特異性抗體相結合，使目標細胞濃聚吸收大量輻射，實現對腫瘤的內照射，是細胞毒作用的一種腫瘤治療新模式。CD133抗原是多種腫瘤干細胞表面獨立表達的特異標記分子，與腫瘤的自我更新、分化潛能、放化療抵抗、復發和預后等密切相關。因此，CD133有可能成為治療肝癌干細胞的新靶點。

基于以上背景，我們設想，腫瘤干細胞表面特異性抗原CD133為靶標，以PtFe磁性納米粒(PtFe-NPs)作為熱療磁介質和基因載體，把自殺基因重組質粒聯合抗CD133McAb靶向核素輸送至腫瘤部位，在外加交變磁場作用下，使納米磁粒加熱升溫進行熱療，并在乏氧輻射雙敏感啟動子調控下使目的基因表達效率提高，從而將核素、基因、高熱多重治療技術有機結合，優勢互補，協同靶向殺滅肝癌干細胞，有可能獲得較好的治療效果。

發明內容