[發(fā)明專(zhuān)利]一種提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201710388758.0
• 申請(qǐng)日: 2017-05-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107238525A
• 公開(kāi)（公告）日: 2017-10-10
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 關(guān)絢麗;劉陽(yáng)
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院原子能利用研究所
• 主分類(lèi)號(hào): G01N1/34
• 分類(lèi)號(hào): G01N1/34;G01N30/06
• 代理公司: 北京紀(jì)凱知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司11245
• 代理人: 關(guān)暢,白艷

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法。

背景技術(shù)

桔霉素主要是由青霉屬、曲霉屬、紅曲霉屬所產(chǎn)生的一種真菌毒素。桔霉素分布廣泛，主要存在于小麥、玉米、燕麥等谷物產(chǎn)品，以及蘋(píng)果、梨等水果的加工制品中。桔霉素具有良好的抑菌性，能抑制枯草芽孢桿菌、金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、灰色鏈霉菌等，但由于桔霉素有很強(qiáng)的腎毒性而沒(méi)有廣泛應(yīng)用，而且其污染問(wèn)題越來(lái)越受到人們的關(guān)注，并被國(guó)際生命科學(xué)院自然毒素檢測(cè)委員會(huì)歐洲分會(huì)列為必須檢測(cè)的毒素之一。

中國(guó)是世界上紅曲生產(chǎn)與應(yīng)用最早、最廣的國(guó)家，而紅曲酒在我國(guó)也已經(jīng)有了一千多年的歷史，其品種多、品質(zhì)好、功能強(qiáng)，逐漸受到國(guó)內(nèi)外的廣泛關(guān)注。紅曲酒中桔霉素毒素含量也成為我國(guó)紅曲酒出口檢驗(yàn)檢疫的主要內(nèi)容。國(guó)內(nèi)外基于不同的檢測(cè)方法對(duì)農(nóng)產(chǎn)品、食品、飼料中所含的桔霉素毒素含量設(shè)立了不同的限制標(biāo)準(zhǔn)，隨著HPLC技術(shù)的不斷完善，檢測(cè)工作日趨簡(jiǎn)單，而樣品的前處理成了技術(shù)關(guān)鍵和難點(diǎn)。目前對(duì)于桔霉素毒素分離純化方法較為復(fù)雜，普遍都是通過(guò)濃縮、過(guò)柱、萃取實(shí)現(xiàn)桔霉素毒素分離，最后通過(guò)TLC或者HPLC進(jìn)行定性定量檢測(cè)。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法。

本發(fā)明提供的提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法包括如下步驟：將紅曲酒與甲醇混勻，反應(yīng)，得到產(chǎn)物，即得到桔霉素毒素。

上述方法中，所述紅曲酒和甲醇的體積比為1：(0.7-2)；所述紅曲酒和甲醇的體積比具體為1：1。

上述方法中，所述甲醇為色譜級(jí)甲醇。

上述方法中，所述反應(yīng)的條件為室溫、200rpm振蕩30-120min；所述振蕩時(shí)間具體為60min。

上述方法中，所述將紅曲酒與甲醇溶液混勻前還包括將紅曲酒充分混勻的步驟。

上述方法中，所述方法還包括對(duì)所述產(chǎn)物進(jìn)行HPLC檢測(cè)的步驟。

本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供上述方法的新用途。

本發(fā)明提供了上述方法在檢測(cè)紅曲或其相關(guān)產(chǎn)品中桔霉素毒素含量中的應(yīng)用。

上述應(yīng)用中，所述紅曲或其相關(guān)產(chǎn)品為紅曲酒。

本發(fā)明的最后一個(gè)目的是提供一種檢測(cè)紅曲酒中桔霉素毒素含量的方法。

本發(fā)明提供的檢測(cè)紅曲酒中桔霉素毒素含量的方法包括如下步驟：用上述方法提取紅曲酒中桔霉素毒素，得到桔霉素毒素待測(cè)樣品，采用高效液相色譜法對(duì)所述桔霉素毒素待測(cè)樣品進(jìn)行檢測(cè)，得到紅曲酒中桔霉素毒素含量。

上述方法或上述應(yīng)用中，所述紅曲酒具體可為市售紅曲酒和造酒廠中未售紅曲原酒。

本發(fā)明利用桔霉素易溶于乙腈、甲醇、乙酸乙酯、丙酮等有機(jī)溶劑的理化性質(zhì)，發(fā)明了一種更為簡(jiǎn)便的提取紅曲酒中桔霉素毒素的方法，有利于推動(dòng)紅曲以及紅曲酒業(yè)的發(fā)展。經(jīng)試驗(yàn)證明，本發(fā)明的方法能夠快速提取紅曲酒中桔霉素毒素，且效率高、耗時(shí)少、成本低、回收率高(<100ng/mL，回收率范圍在60-120％；100-1000ng/mL，回收率范圍在80-110％)，符合實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制規(guī)范-食品理化檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)(GB/T 27404)，另外，此方法也極大簡(jiǎn)便了紅曲及其相關(guān)產(chǎn)品中桔霉素毒素的提取，具有極高的推廣和應(yīng)用價(jià)值。

附圖說(shuō)明

圖1為桔霉素毒素含量檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)圖譜。

圖2為2000ng/mL桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品的HPLC圖譜。

圖3為紅曲酒樣品A的HPLC圖譜及在紅曲酒樣品A中加入100μL不同濃度的桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的HPLC圖譜。其中，圖3A為紅曲酒樣品A的HPLC圖譜；圖3B為在紅曲酒樣品A中加入100μL 2000ng/mL桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的HPLC圖譜；圖3C為在紅曲酒樣品A中加入100μL 1000ng/mL桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的HPLC圖譜；圖3D為在紅曲酒樣品A中加入100μL 500ng/mL桔霉素毒素標(biāo)準(zhǔn)品后的HPLC圖譜。

具體實(shí)施方式

下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。

下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。

下述實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。

下述實(shí)施例中的桔霉素標(biāo)準(zhǔn)品是Sigma公司(美國(guó))的產(chǎn)品。

下述實(shí)施例中的色譜級(jí)甲醇是Fisher公司(美國(guó))的產(chǎn)品。

桔霉素標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的制作方法如下所示：