[發明專利]一種檢測動物源食品中磺胺類、喹諾酮類獸藥殘留的方法

在審

• 申請號: 201710388559.X
• 申請日: 2017-05-26
• 公開（公告）號: CN106990195A
• 公開（公告）日: 2017-07-28
• 發明（設計）人: 李彭;王杰;裴斐;方勇;胡秋輝;劉琴
• 申請（專利權）人: 南京財經大學
• 主分類號: G01N30/06
• 分類號: G01N30/06;G01N30/88
• 代理公司: 江蘇圣典律師事務所32237
• 代理人: 鄧麗,王偉

技術領域

本發明涉及一種豬肉中磺胺類、喹諾酮類獸藥殘留的檢測方法，屬于儀器檢測技術領域。

背景技術

在現代化農業生產過程中，魚肉、雞肉、豬肉等動物源食品在飼養環節中往往在飼料中使用大量的抗生素來輔助預防和治療疾病。但是，這些藥物的濫用或者不恰當的使用可能會對人體造成潛在的危害。于是，獸藥殘留的問題也逐漸成為人們普遍關注的社會焦點。

目前的獸藥前處理技術主要包括：液液萃取、固相萃取及QuEChERS等。液液萃取法操作時間冗長，使用較多對人體與環境有害的有機溶劑。固相萃取法常用于凈化微量或痕量物質，對于復雜基質會存在回收率低、易堵塞填料等不足。QuEChERS技術一般以乙腈或酸化乙腈為提取劑，以C₁₈、石墨烯等作為吸附劑吸附雜質。

發明內容

本發明提供了一種能同時檢測動物源食品中33種磺胺類、喹諾酮類獸藥殘留的方法，利用高效液相色譜串聯飛行時間質譜方法，用酸化乙腈作為提取劑，正己烷作為凈化劑，從而快速檢測動物源食品樣品中的獸藥殘留。

本發明提供的方法包括下列步驟：

(1)標準工作溶液的配制：

將常見的17種磺胺類及16種喹諾酮類獸藥分別用乙腈定容配制成質量濃度為1000mg/L的單標準儲存液，置于棕色瓶中，-20℃儲藏。將上述儲存液用乙腈稀釋為1.0mg/L的混合標準儲存液備用。

(2)樣品前處理：

取0.5g肉沫于15ml離心管中，加入2ml 1％甲酸乙腈，劇烈震蕩5min，在室溫條件下，4500rmp離心10min；取上清液，加入2ml正己烷震蕩2min，靜置分層，去掉上層正己烷層，重復去脂一次。上清液用水稀釋一倍，然后過0.22μm濾膜上機測試。

(3)液質分離檢測：

流動相A：0.1％甲酸水溶液，流動相B：乙腈；柱溫：40℃，流速：0.3ml/min。進樣量：10μl。

梯度洗脫程序：

0～2min，5％B～20％B；2～7min，20％B～55％B；7～9min，55％B；9～13min，55％B～90％B；13～16min，90％B；16～16.5min，90％～5％B；16.5～21min，5％B。

本發明采用上述方法檢測魚肉、雞肉、豬肉等動物源食品中的獸藥殘留。

本發明的有益效果：

一般情況下，建立獸藥定量方法時采用三重四極桿質譜，然而對于前處理簡便，基質復雜的情況下，三重四極桿選擇性具有一定的局限性，可能會導致檢測結果不準確。對于高分辨質譜而言，分子量是準確測量，具有很強的選擇性。本方法以復雜基質豬肉為例，采用TripleTOF 5600+建立了2類33種獸藥的快速定量分析方法，對于采用高分辨質譜定量分析常規藥物而言具有重要的參考意義。

具體實施方式

以下結合具體實施例對本發明作進一步說明。以復雜基質豬肉為例，采用TripleTOF 5600+建立了2類33種獸藥的快速定量分析方法。

實施例1

取0.5g豬肉于15ml離心管中，分別添加2和10μg/kg兩個水平的33種獸藥混合標準溶液，加入2.00ml 1％甲酸乙腈，劇烈震蕩5min，在室溫條件下，4500rmp離心10min；取上清液，加入2.00ml正己烷震蕩2min，靜置分層，去掉上層正己烷層，重復去脂一次。上清液用水稀釋一倍，然后過0.22μm濾膜，平行測定每個水平的加標樣品各3次，供液質分析。

實施例2標準曲線及檢測限

取0.5g豬肉于15ml離心管中，加入2.00ml 1％甲酸乙腈，劇烈震蕩5min，在室溫條件下，4500rmp離心10min；取上清液，加入2.00ml正己烷震蕩2min，靜置分層，去掉上層正己烷層，重復去脂一次。濃縮至干后，加入1.00ml混合標準溶液復溶，渦旋混勻，過0.22μm濾膜，配制3個水平的基質匹配混合標準溶液，以目標化合物定量離子的峰面積(Y)為縱坐標、質量濃度(X，μg/L)為橫坐標繪制曲線，相關系數r為0.99004～0.99995，線性關系良好。以定量離子信噪比S/N＝3確定樣品的檢出限(LOD)，S/N＝10為定量下限(LOQ)。

結果表明，33種獸藥的LOD為0.8～2.4μg/kg，LOQ為2.67～8.00μg/kg。具體結果見表1。

表1各組分基質匹配線性方程、相關系數(r)、檢出限和定量限