[發明專利]多重擴增循環檢測

在審

• 申請號: 201710384601.0
• 申請日: 2013-09-09
• 公開（公告）號: CN107400707A
• 公開（公告）日: 2017-11-28
• 發明（設計）人: R.P.拉斯穆森;R.J.克里斯普;A.C.赫默特;E.D.B.坎貝爾;T.C.羅賓斯;D.J.艾爾
• 申請（專利權）人: 拜奧法爾診斷有限責任公司
• 主分類號: C12Q1/68
• 分類號: C12Q1/68;C12M1/34
• 代理公司: 中國專利代理(香港)有限公司72001
• 代理人: 彭昶,周李軍

1.用于鑒定樣品中含有多種生物中的哪些的方法，包括

提供多個樣品孔，每個樣品孔含有部分樣品和用于擴增來自多種生物中的不同生物的靶核酸序列的引物，

同時使多個樣品孔經受擴增條件，經歷若干擴增循環，

檢測第一組多個樣品孔的每個中是否發生擴增，

同時使多個樣品孔經受擴增條件，經歷若干額外的擴增循環，

檢測第二組多個樣品孔的每個中是否發生擴增，

通過鑒定至少一個發生擴增的對應樣品孔鑒定樣品中存在的至少一種生物。

2.權利要求1的方法，其中第一個檢測步驟不涉及檢測第二組多個樣品孔中是否發生擴增，第二個檢測步驟不涉及檢測第一組多個樣品孔中是否發生擴增。

3.權利要求2的方法，其中第一組第一個樣品孔的陽性或陰性判定決定第二個樣品孔是在第一組還是在第二組中。

4.權利要求1的方法，進一步包括

同時使多個樣品孔經受擴增條件，經歷另一個若干額外擴增循環，

檢測第三組多個樣品孔的每個中是否發生擴增。

5.權利要求4的方法，其中擴增循環的數目為20個PCR循環，額外擴增循環的數目為6個額外的PCR循環，另一個額外擴增循環的數目為6個額外的PCR循環。

6.權利要求4的方法，進一步包括至少一個額外的同時使多個樣品孔經受擴增條件經歷又一個若干額外擴增循環的步驟和至少一個額外的檢測步驟。

7.權利要求4的方法，其中第一組多個樣品孔配置為擴增來自以最高滴度存在的生物的靶核酸序列并具有最高的不期望陽性的風險，第二組多個樣品孔配置為擴增來自以高滴度存在的生物的靶核酸序列并具有中等的不期望陽性的風險，第三組多個樣品孔配置為擴增來自以低滴度存在的生物的靶核酸序列并具有低的不期望陽性的風險。

8.權利要求1的方法，其中所述檢測步驟包括使多個樣品孔經受熔解條件和檢測靶核酸序列是否發生熔解。

9.權利要求8的方法，其中檢測是否發生熔解包括檢測多個樣品孔的每個在預定溫度范圍內的熔解峰。

10.權利要求1的方法，其中檢測步驟包括分析每個樣品孔的擴增曲線。

11.權利要求10的方法，其中分析擴增曲線包括測定交叉點。

12.權利要求1的方法，進一步包括在提供步驟前使樣品經受多重擴增。

13.權利要求12的方法，其中所有步驟在單獨的封閉系統中進行。

14.權利要求1的方法，其中所有檢測步驟包括檢測多個樣品孔的任一中是否發生擴增。

15.權利要求1的方法，其中第一個檢測步驟中的陽性判定指示染色體整合，第一個檢測步驟中的陰性判定并且第二個檢測步驟中的陽性判定指示臨床-相關感染。

16.權利要求1的方法，其中每個樣品孔進一步包含熒光染料，第一個檢測步驟采用第一個水平的照明，第二個檢測步驟采用第二個水平的照明。

17.權利要求16的方法，其中第二個水平比第一個水平高，并且進一步包括步驟：

同時使多個樣品孔經受擴增條件，經歷額外若干個額外擴增循環，

通過采用第三個水平的照明檢測第二組多個樣品孔的每個中是否發生擴增，第三個水平比第二個水平高。

18.用于鑒定樣品中含有多個靶核酸中的哪些的方法，包括

提供多個樣品孔，每個樣品孔具有用于擴增來自多個靶核酸序列中不同序列的基因座的引物，

將一部分樣品移至多個樣品孔的每個中，

同時使多個樣品孔經受擴增條件經歷若干擴增循環，

檢測第一組多個樣品孔的每個中是否發生擴增，

同時使多個樣品孔經受擴增條件，經歷若干額外的擴增循環，

檢測第二組多個樣品孔的每個中是否發生擴增，

通過鑒定發生擴增的對應樣品孔鑒定樣品中存在的靶核酸。

19.權利要求18的方法，進一步包括

在單個多重擴增反應中同時擴增所有基因座，然后進行轉移步驟。

20.權利要求18的方法，其中檢測步驟包括檢測指示擴增的熒光的變化。